[发明专利]一种新型隐球菌多克隆抗体的制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及抗体及其制备方法，特别是用于针对新型隐球菌荚膜多糖(Glucuronoxylom-annan，GXM)抗原的一种多克隆抗体及其制备方法。

背景技术

新型隐球菌(Crytococcus Neoformans)是一种重要的条件致病菌，常感染免疫能力低下或免疫能力缺陷的患者，导致以中枢神经系统感染为主的深部真菌感染，病死率很高。

近年来由于广谱抗菌药物、肾上腺皮质激素、肿瘤化疗、放疗和器官移植后免疫抑制剂的长期广泛应用，以及艾滋病的流行，真菌性脑膜炎明显增多。而新型隐球菌性脑膜炎(以下简称“隐脑”)是由新型隐球菌所致的最常见的中枢神经系统疾病。隐脑占所有新型隐球菌感染导致疾病的80％左右。隐脑临床表现复杂，症状不典型，因而很难诊断，约80％的隐脑患者会被误诊为结核性脑膜炎。目前国际上开展的检测方法主要有以下3大类：

1.印度墨汁染色法，该法敏感性差，阳性检出率很低；

2.血培养或脑脊液培养等培养的方法，该法敏感性差，阳性检出率不高；

3.免疫学检测法：用特异性针对新型隐球菌荚膜多糖抗原GXM的抗体实现对新型隐球菌的检测，检测血液和脑脊液的敏感性都能达到85％以上。免疫学检测方法灵敏度和特异性都较前两种方法有明显的优势，正逐渐成为新型隐球菌检测的常用方法。

免疫检测技术是利用抗原抗体间能特异性结合反应，通过检测标记在反应物上的标记物，对抗原或抗体实现定性或定量检测的方法。根据标记物质的不同，分为酶联免疫分析技术(Enzyme-Linked Immunosorbant Assay，ELISA)、免疫荧光检测技术、化学发光免疫分析技术、免疫微球技术、免疫胶体金技术等。其中ELISA技术具有操作简单，灵敏度高，检测时间短的特点，在临床检测和科学研究中被广泛使用。

在新型隐球菌的临床检测中，目前国际市场上有为数不多的免疫检测产品，如：Meridian公司的乳胶凝集法和ELISA法检测试剂盒产品，IMMY公司的乳胶凝集法产品和胶体金法产品，Bio-Rad公司的乳胶凝集法产品。我国国内并没有真正用于新型隐球菌临床检测的免疫学检测产品。而免疫学检测产品的关键在于能否得到合适的抗体，因此，制备针对新型隐球菌荚膜多糖GXM抗原的抗体成为开发该抗原检测产品的关键。

多糖类物质因为结构特殊、免疫原性差、结构类似，很多是半抗原，很难像蛋白免疫原一样容易得到单克隆抗体，经常需要对抗原表位进行化学修饰，使其成为完全抗原才能进行免疫。国内目前并未见关于抗新型隐球菌荚膜多糖抗原GXM的多克隆抗体制备的报道。

综上所述，在新型隐球菌临床检测领域，迫切需要制备出抗新型隐球菌荚膜多糖抗原GXM的抗体。

本发明详细描述

本发明的目的在于提供一种抗新型隐球菌荚膜多糖抗原GXM的多克隆抗体。

本发明的目的在于提供一种制备抗新型隐球菌荚膜多糖抗原GXM的多克隆抗体的方法。

本发明所使用的新型隐球菌荚膜多糖抗原GXM由天津贻诺琦生物工程有限公司提供(专利申请号：201110240065.X)。

本发明技术方案如下：

步骤：

1.用GXM抗原免疫动物。

2.测定免疫后动物的血清效价，从免疫后的动物体内取血。

3.用饱和硫酸铵盐析法和亲和层析法对血清进行纯化，得到纯化的多克隆抗体。

上述步骤2中免疫的方法是多种多样的，如：脾内注射法，腹腔注射法等。免疫剂量可视具体动物种类而定。用于制备GXM多克隆抗体的动物可以是鼠、兔、鸡、羊、马、猪、驴等可用于免疫的动物。

上述步骤3中免疫后的动物可处死后采血，也可以不处死，饲养过程中每次采一定量的血。

上述步骤4中用于抗体纯化的方法可以是饱和硫酸铵盐析沉淀法和亲和层析法等。

用上述方法制备得到的多克隆抗体及其他种属来源的多克隆抗体是需要本发明保护的。

本发明提供了一种抗新型隐球菌荚膜多糖抗原GXM的多克隆抗体，及抗新型隐球菌荚膜多糖抗原GXM的多克隆抗体的制备方法。在本发明的制备方法中，GXM抗原是从新型隐球菌的培养物中制得(专利申请号：201110240065.X)，该抗原为国内首例提纯的新型隐球菌荚膜多糖抗原，因而本发明得到的多克隆抗体为国内首例抗新型隐球菌荚膜多糖抗原的多克隆抗体，填补了国内空白。

实验证明，用本发明所属方法制得的多克隆抗体具有效价高，特异性好的特点，有很强的应用前景。

附图描述：