[发明专利]检测喹噁啉-2-羧酸残留的免疫胶体金试纸及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种兽药残留免疫化学快速检测技术领域，具体涉及喹噁啉-2-羧酸(QCA)残留的免疫胶体金试纸及其制备方法。 

背景技术

卡巴氧作为抗菌促生长剂，广泛应用于畜禽养殖，能促进动物生长、提高饲料转化率、预防和控制猪痢疾和细菌性肠炎。代谢研究和毒理学研究表明，卡巴氧在猪体内迅速转化成脱一氧和脱二氧化合物，其原形和脱氧化合物对人和动物有一定的毒性作用，主要表现为诱癌性、致突变作用、繁殖毒性。因此，1999年欧盟禁止卡巴氧在食品动物中应用，2001年加拿大也颁布法令禁止卡巴氧在市面上销售，2003年食品添加剂联合专家委员会(JECFA)对卡巴氧进行了再评价，委员会决定对卡巴氧撤销其最大残留限量(MRLs)，该残留限量由JECFA于1999年规定，肌肉和肝脏分别为5和30μg/kg。喹噁啉-2-羧酸是卡巴氧在猪体内最稳定的代谢产物，被欧盟法定为卡巴氧在猪食用组织中的残留标识物。目前在动物性食品中喹噁啉-2-羧酸的分析检测方法有很多，包括高效液相色谱法(HPLC)、液质连用(LC-MS)、气质连用(GC-MS)和ELISA。仪器检测主要存在仪器购置费用昂贵、样品前处理复杂、程序繁琐费时、检测费用高、不能现场操作等缺陷，所以在生产中应用受到限制。ELISA方法灵敏度高、成本低，在药物残留检测中应用也很广泛，但该方法需要酶标仪等实验室设备， 分析时间长，难于应用与现场应用等局限性。近年来，胶体金免疫层析技术(GICA)与目前普遍采用的标记免疫分析技术相比，具有简便快速，特异性强、敏感性高，肉眼判断，实验结果易保存，无需特殊仪器设备等优点，因此GICA技术在药物残留检测领域得到了广泛应用。目前还没有针对喹噁啉-2-羧酸残留检测的免疫胶体金试纸及其制备方法的专利和文献报道。 

发明内容

为解决以上技术问题，本发明的目的之一在于提供一种能快速检测、准确可靠检测喹噁啉-2-羧酸残留的免疫胶体金试纸 

本发明的的之二在于提供一种能快速检测、准确可靠检测喹噁啉-2-羧酸残留的免疫胶体金试纸的制备方法。 

本发明目的之一是这样实现的：一种检测喹噁啉-2-羧酸药物残留的免疫胶体金试纸，包括背板(2)，该背板(2)上设置手控区、测试区和样品端，所述测试区位于背板(2)中部，所述手控区和样品端位于背板(2)两个端部，其关键在于：所述手控区由吸水垫(3)和手控区封膜(1)组成，所述吸水垫(3)粘附在背板(2)，该吸水垫(3)上表面及外端面和背板(2)外端面粘附手控区封膜(1)，所述测试区为粘附在背板(2)上的硝酸纤维素膜(4)，所述硝酸纤维素膜(4)上包被有羊抗兔IgG的质控线(5)和喹噁啉-2-羧酸-牛血清白蛋白偶联物的检测线(6)，所述样品端由结合垫(7)、样品垫(8)和样品端封膜(9)组成，所述背板(2)上由测试区到外端依次粘附结合垫(7)和样品垫(8)，该样品垫(8)搭在结合垫(7)上，所述样品垫(8)上表面及外端面和背板(2)外端面粘附样品端封膜(9)。 

本发明目的之二是这样实现的：检测喹噁啉-2-羧酸药物残留的免疫胶体金 试纸的制备方法，其特征在于按如下步骤进行： 

步骤一：将半抗原喹噁啉-2-羧酸与牛血清白蛋白偶联合成偶联物免疫原，待用； 

步骤二：将步骤一中的偶联物免疫原免疫兔，得到特异性抗兔抗喹噁啉-2-羧酸的多克隆抗体，将多克隆抗体加入胶体金中得到抗喹噁啉-2-羧酸多克隆抗体-胶体金标记物，将抗喹噁啉-2-羧酸多克隆抗体-胶体金标记物包被在结合垫(7)上； 

步骤三：将步骤一中的偶联物免疫原包被在硝酸纤维素膜(4)得到检测线检测线(6)，将羊抗兔IgG包被在硝酸纤维素膜(4)得到质控线(5)； 

步骤四：将受控区封膜(1)，吸水垫(3)，硝酸纤维素膜(4)，结合垫(7)，样品垫(8)和样品端封膜(9)一次粘贴在背板上，得到检测喹噁啉-2-羧酸药物残留的免疫胶体金试纸。 

本发明中的吸水垫、硝酸纤维素膜、结合垫、样品垫等均购自Millipore公司。