[发明专利]氢氧化铝凝胶-多糖复合免疫佐剂及其制备方法和用途

说明书

技术领域

本发明属于生物医药领域，具体涉及一种氢氧化铝-多糖复合免疫佐剂及其制备方法和用途。

背景技术

佐剂作为改善机体对疫苗抗原的免疫应答已经有几十年应用的历史了。疫苗中加入佐剂目的是为了加强抗原的免疫原性和免疫保护效果，表现为增强特异性抗原的特异性体液免疫和/或细胞免疫反应，从而可以提高特异性抗体的产生或/和特异性细胞免疫功能，减少有效免疫接种所需的抗原量，减少需要加强免疫接种的频率，提高早期免疫应答和免疫功能不全者的应答成功率等等。

以氢氧化铝和磷酸铝为代表的铝佐剂至今仍然是我国被批准合法使用的人用疫苗佐剂。其主要功能为缓释，但同时具有对免疫细胞的激活作用。将蛋白质和氢氧化铝或磷酸铝混合注射，能够使抗原保存在注射部位，即“库存效应”，具有抗原缓释和非特异免疫刺激作用。氢氧化铝或磷酸铝对促进抗原的吸收具有重要作用，但铝盐佐剂的作用机理目前尚不完全清楚。一般认为铝胶体对蛋白质分子具有很好的吸附作用。

大量的临床免疫试验认为氢氧化铝胶体佐剂对Th2介导的体液免疫反应具有很强的激发作用，而对Th1介导的细胞免疫反应的作用较弱。如何提高铝佐剂的Th1介导的细胞免疫，既能有效地诱导机体产生体液免疫，又能有效地诱导细胞免疫则是目前免疫佐剂研究的重点与难点。本领域目前需要提供新的、性能良好的免疫佐剂，为疫苗的制备提供新的有效选择。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种新的、性能良好的复合免疫佐剂，为本领域提供一种新的有效选择。

解决该技术问题的技术方案是提供一种复合免疫佐剂。该复合免疫佐剂主要含有氢氧化铝凝胶和细菌来源的多糖。

其中，上述复合免疫佐剂所述细菌来源的多糖为大肠杆菌来源的多糖和伤寒杆菌来源的多糖。

其中，上述复合免疫佐剂中所述细菌来源的多糖和氢氧化铝凝胶的重量配比为1∶0.5～100。优选的，上述复合免疫佐剂中所述细菌来源的多糖和氢氧化铝凝胶的重量配比为1∶1～25。

其中，上述复合免疫佐剂中所述氢氧化铝凝胶为粒径为2μm～4μm的氢氧化铝颗粒。粒径3μm左右为佳。

本发明另外还提供了上述复合免疫佐添加抗原形成的免疫佐剂-抗原复合物。免疫佐剂-抗原复合物在本领域也可称为疫苗。

其中，上述免疫佐剂-抗原复合物中所述抗原的含量为复合免疫佐剂中细菌来源的多糖的重量配比为1∶0.02～500。

进一步的，上述免疫佐剂-抗原复合物中所述抗原的含量为复合免疫佐剂中细菌来源的多糖的重量配比为1∶1～200。

其中，上述免疫佐剂-抗原复合物中所述抗原为乙型肝炎表面抗原HBsAg蛋白或血管生成因子bFGF蛋白。

本发明另外还提供了制备上述的免疫佐剂-抗原复合物的方法。该方法包括以下步骤：

a、取所需量的氢氧化铝凝胶用水稀释；

b、加入所需的多糖，混匀；

c、加入所需抗原，混匀。

进一步的，上述的所需抗原为HBsAg或bFGF。

本发明同时提供了上述免疫佐剂-抗原复合物在制备疫苗中的用途。所述疫苗为预防和/或治疗性疫苗。比如当抗原为HBsAg等肝炎抗原时，可以制备成为肝炎疫苗，比如当抗原为血管生成因子(如bFGF)或者肿瘤特异性抗原时，可以制备预防和/或治疗性肿瘤疫苗。

根据本发明的第一个方面，为了开发更优秀的免疫佐剂。本发明前期研究了氢氧化铝凝胶、水凝胶(Hydrogel)、脂质体、Lipid A、甘露聚糖、多糖(细菌来源)等佐剂。偶然发现氢氧化铝凝胶/细菌多糖(Al-PS)组合作为佐剂，既能有效地诱导机体产生体液免疫，又能有效地诱导细胞免疫。

为了构建好的可用于免疫佐剂的氢氧化铝多糖考察了多种氢氧化铝多糖配方。本发明进一步对不同种类的多糖进行筛选，发现使用大肠杆菌来源的多糖和伤寒杆菌来源的多糖与氢氧化铝的复合物作为佐剂制成的疫苗，在肝炎疫苗模型中，体内产生了针对HBsAg的高滴度的抗体；在肿瘤疫苗模型中，体内产生了针对bFGF的抗体，且能有效抑制肿瘤生长与转移。

同时，为了取得更好的效果，对氢氧化铝和多糖使用剂量进行了筛选，完成了对氢氧化铝和多糖配方的优化。免疫试验中通过与标准佐剂——弗氏佐剂比较，本发明氢氧化铝多糖作为佐剂产生的抗体滴度也令人满意。在以bFGF作为抗原的动物肿瘤模型实验中，用氢氧化铝多糖包裹bFGF制备得到的bFGF氢氧化铝多糖疫苗也能得到该免疫效果，甚至更好。同时，bFGF氢氧化铝多糖疫苗的抑制肿瘤转移的效果也不低于弗氏佐剂。