[发明专利]一种邻苯二甲酸二丁酯快速检测用胶体金免疫试纸及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种邻苯二甲酸二丁酯快速检测用胶体金免疫试纸，其特征在于：包括反应膜、样本垫、结合物释放垫、吸水垫和背衬，在所述的反应膜上包被有邻苯二甲酸二丁酯-载体蛋白偶联物的测试区和羊抗鼠IgG的质控区，结合物释放垫包被有邻苯二甲酸二丁酯单克隆抗体-胶体金标记物。

2.根据权利要求1所述的邻苯二甲酸二丁酯快速检测用胶体金免疫试纸，其特征在于：所述的样本垫，结合物释放垫、反应膜及吸水垫依次设置在背衬上。

3.根据权利要求1所述的邻苯二甲酸二丁酯快速检测用胶体金免疫试纸，其特征在于：所述的邻苯二甲酸二丁酯-载体蛋白偶联物由邻苯二甲酸二丁酯经过硝化与还原反应后形成4-氨基邻苯二甲酸二丁酯半抗原，然后与载体蛋白偶联得到。

4.根据权利要求3所述的邻苯二甲酸二丁酯快速检测用胶体金免疫试纸，其特征在于：所述邻苯二甲酸二丁酯-载体蛋白偶联物中的载体蛋白为牛血清白蛋白、人血清白蛋白、钥孔血蓝蛋白、卵清蛋白、铁蛋白或多聚赖氨酸。

5.根据权利要求1所述的邻苯二甲酸二丁酯快速检测用胶体金免疫试纸，其特征在于：所述的邻苯二甲酸二丁酯单克隆抗体-胶体金标记物中的邻苯二甲酸二丁酯单克隆抗体是以邻苯二甲酸二丁酯-载体蛋白偶联物作为免疫抗原免疫试验动物后制备获得。

6.一种制备如权利要求1所述邻苯二甲酸二丁酯快速检测用胶体金免疫试纸的方法，其特征在于，具体步骤如下：

(1)制备包被邻苯二甲酸二丁酯单克隆抗体-胶体金标记物的结合物释放垫；

(2)制备具有包被邻苯二甲酸二丁酯-载体蛋白偶联物的测试区和包被羊抗鼠IgG的质控区的反应膜；

(3)将步骤(1)制备好的结合物释放垫和步骤(2)制备好的反应膜与样本垫、吸水垫和背衬组装成试纸。

7.根据权利要求6所述的制备邻苯二甲酸二丁酯快速检测用胶体金免疫试纸的方法，其特征在于，具体包括以下步骤：

(1)半抗原制备：将邻苯二甲酸二丁酯与经过硝化与还原反应后形成4-氨基邻苯二甲酸二丁酯半抗原；

(2)将邻苯二甲酸二丁酯与载体蛋白偶联，形成邻苯二甲酸二丁酯-载体蛋白偶联物；

(3)用邻苯二甲酸二丁酯-载体蛋白偶联物免疫小鼠，将小鼠脾细胞和小鼠骨髓瘤细胞通过融合、筛选，得到分泌邻苯二甲酸二丁酯的单克隆抗体杂交瘤细胞株；

(4)用柠檬酸三钠与氯金酸反应制备胶体金；

(5)将制备的邻苯二甲酸二丁酯单克隆抗体加入步骤4)制备的胶体金中，得到邻苯二甲酸二丁酯单克隆抗体-胶体金标记物；

(6)将邻苯二甲酸二丁酯单克隆抗体-胶体金标记物包被在结合物释放垫上，用含0.1-1.5％卵清蛋白的磷酸氢二钠和磷酸二氢钠配制的缓冲液浸湿30秒，37℃烘2h备用；

(7)将邻苯二甲酸二丁酯-人血清白蛋白偶联物(HSA)包被在反应膜上构成测试区，并将羊抗鼠IgG包被在反应膜上构成质控区，用含0.1％牛血清的封闭液进行封闭；

(8)将样本垫：0.1-1.5％的兔血清蛋白、1-1.5％吐温-20用磷酸氢二钠和磷酸二氢钠配制的缓冲液浸泡2h，37℃烘2h备用；

(9)邻苯二甲酸二丁酯胶体金试纸卡的组装：在背衬上按顺序依次粘附反应膜、吸水垫、结合物释放垫和样本垫，然后切成3mm宽的小条，加塑料盒，真空包装。

8.一种如权利要求1所述的邻苯二甲酸二丁酯快速检测用胶体金免疫试纸在检测邻苯二甲酸二丁酯残留中的应用。