[发明专利]调控斑马鱼卵黄蛋白原水平的方法

说明书

技术领域

本发明涉及到一种评价有机污染物对水生生物内分泌毒害或干扰的方法，尤其涉及到一种检验水生生物体内内分泌是否受到外源环境中低浓度类雌激素干扰物毒害或干扰的方法，属于类雌激素干扰物的检验领域。

背景技术

生态环境中的化学污染物质干扰人类和野生动物的内分泌功能，从而对个体的生殖、发育和性行为等产生多方面的影响，甚至会影响到人类的生存繁衍(Tilghman S L，Nierth-Simpson E N，Wallace R，et al.Environmental hormones：Multiple pathways for response may lead to multiple disease outcomes[J].Steroids，2010，75(8-9)：520-523)。因而国际组织和发达国家对内分泌干扰危害效应监控实行强制管理，如联合国GHS(全球化学品统一分类和标签制度)和欧盟REACH(化学物质注册、评估、授权和限制)法规1907/2006(EC)中均对内分泌干扰化学物质提出了明确管控要求。

卵黄蛋白原(VTG)是卵黄蛋白的前体，通常受循环的内源性雌激素刺激，由雌性卵生脊椎动物肝脏产生，由血流进入卵巢，并被发育中的雌性配子吸收并改变。它是直接通过雌激素受体调节途径来合成的，一般只在成熟雌鱼体内合成，而在幼鱼或成年雄鱼体内含量很低，难以检测出。但在受外源性的雌激素的刺激下，肝脏能够合成并分泌VTG。因此，通过测量VTG水平的变化，能够探索不同化学物质的内分泌干扰作用机制。

全氟碳化合物(PFCs)已成为重要的持久性有机污染物(POP s)，广泛分布于环境、野生动物和人类中。其中代表性的全氟辛烷磺酰基化合物(Perfluorooctanesulphonate，PFOS)、全氟辛酸(Perfluorooctanoic acid，PFOA)以及它们的衍生物已成为新型持久性有机污染物质，可以通过呼吸和食物被生物体摄取，有很高的生物蓄积性，可能具有内分泌干扰毒性、遗传毒性、肝脏毒性等(Jensen A A，Leffers H.Emerging endocrine disrupters：perfluoroalkylated substances[J].International Journal of Andrology，2008，31(2)：161-169；Clarke B O，Smith S R.Review of‘emerging’organic contaminants in biosolids and assessment of international research priorities for the agricultural use of biosolids[J].Environment International，2011，37(1)：226-247)，其工业生产已于2000年禁止。在2009年5月4日-8日在瑞士日内瓦召开的“有关持久性有机污染物的斯德哥尔摩公约”会议上，鉴于PFOS，其盐化合物以及全氟辛烷磺酰氟等的剧毒性和持久性，将它们列入斯德哥尔摩公约新增受控化学物质范围。

当水生生物处于高浓度类雌激素干扰物的外源环境的毒害或污染下会遭受到急性毒性损伤，从而呈现出较为明显的形态特征变化或生理变化，再结合采用多种生物标记物，可以非常准确和灵敏的检验出水生生物是否受到外源环境中高浓度类雌激素干扰物的毒害或污染。当水生生物受到低浓度的类雌激素干扰物的毒害或污染时，无论是外部的形态特征还是内部的生理指标都不会出现较为明显的变化；此外，现有的用于评价类雌激素干扰物对于水生生物内分泌干扰效应的生物标志物均不同程度的存在敏感性较差、准确率较低的缺陷。建立一种灵敏性好、准确率高的评价水生生物内分泌是否受到类雌激素干扰物干扰的方法，对于展开相关的科学研究以及环境污染物监控和安全管理等具有重要的意义。

发明内容

为了克服上述现有技术的不足，本发明人进行了锐意研究，发现，在暴露于低剂量的诸如全氟辛烷磺酰基化合物(Perfluorooctanesulphonate，PFOS)或全氟辛酸(Perfluorooctanoic acid，PFOA)等类雌激素干扰物时，虽然斑马鱼，特别是雄性斑马鱼体征没有发生明显变化，但斑马鱼的血浆、全鱼匀浆液或头尾组织匀浆液中的卵黄蛋白原(VTG)的含量明显升高，通过检测水生生物的血浆、全鱼匀浆液或头尾匀浆液的卵黄蛋白原(VTG)的含量就可以灵敏、准确地确定水生生物是否受到外源环境中低剂量类雌激素干扰物毒害或干扰，由此完成本发明。