[发明专利]一种啤酒花多糖的提取和脱蛋白方法

权利要求书

1.一种从啤酒花中提取啤酒花多糖并脱除蛋白的方法，其特征在于包括以下步骤:

   (1) 以采用CO₂、有机溶剂为提取剂提取过啤酒花浸膏的废渣为原料，控制萃取温度为25~95℃、用水提取1~3次，料液比为1:3~1:20，萃取时间为1~10小时，使得啤酒花中的可溶性糖类组分溶解在水中，在萃取期间，采用微波辅助萃取5~30min；   

(2) 过滤或离心，分离出水溶液，滤渣重复上述步骤（1）的操作一次，合并两次的提取溶液，并浓缩到原提取液总体积的10%~30%，向浓缩液中加入一定体积的高浓度乙醇，使溶液的乙醇浓度达到30%~85%，静置12~24h，其中的多糖类组分从溶液中沉淀析出，过滤或离心分离出其中的沉淀；溶液经适度浓缩后再次加入一定体积的高浓度乙醇溶液，使其中的乙醇溶液达到30~85%；静置12~24h，再次过滤或离心分离出其中的沉淀；溶液弃去，合并两次得到的沉淀；

  (3)上述步骤（2）中得到的沉淀再次溶解到一定体积的蒸馏水或去离子水中，过滤或离心分离出其中的不溶物，溶液再次加入高浓度的乙醇，使溶液中的乙醇浓度达到30-85%，静置过夜后，离心分离出其中的沉淀；沉淀用少量高浓度的乙醇洗涤后，在低于50℃的温度下真空干燥或冷冻干燥，得到啤酒花多糖的粗品；

(4)上述步骤（3）中得到的啤酒花多糖的粗品，溶解在蒸馏水或去离子水中，先用活性炭或过氧化氢脱色，然后采用酶-化学法联用进行脱蛋白处理,脱除了蛋白质的多糖溶液，再经醇析，离心分离，少量高浓度乙醇洗涤，真空干燥或冷冻干燥后，得到啤酒花多糖的精制品；

(5)上述步骤(4)中得到的啤酒花多糖的精制品，用少量蒸馏水或去离子水溶解，再经DEAE-纤维素柱柱层析后，收集含有多糖组分的溶液，浓缩后再经透析袋透析、醇析、离心分离，在低于50℃的温度真空干燥或冷冻干燥后，得到高纯度的啤酒花多糖。

2.根据权利要求１所述的方法，其特征在于优选的提取温度为80~90℃，提取时间为1~2h；微波作用时间为12~15min。

3.根据权利要求１所述的方法，其特征在于所述的高浓度的乙醇为含量大于90%的乙醇溶液或无水乙醇。

4.根据权利要求１所述的方法，其特征在于所述的酶-化学法联用脱除蛋白的方法为将啤酒花多糖的粗品溶解在蒸馏水或去离子水中，先采用0.5-3.0mg/mL菠萝蛋白酶或木瓜蛋白酶处理，控制溶液的温度为35~65℃、酶底比为0.5~5.0%、pH值为5.0~9.0，酶解时间为0.5~4h；待反应完成后，用盐酸调节溶液的pH值至2.0~4.0之间，低温下静置过夜，离心，弃去沉淀收集清液；清液中加入相当于溶液体积1/3~1/5的正丁醇试剂，搅拌20-30min后，离心分离，弃去正丁醇层，水层即为脱除了蛋白质的多糖溶液。

5.根据权利要求１所述的方法，其特征在于所述的酶-化学法联用脱除蛋白的方法为将啤酒花多糖的粗品溶解在蒸馏水或去离子水中，先采用0.5-3.0mg/mL菠萝蛋白酶或木瓜蛋白酶处理，控制溶液的温度为35~65℃、酶底比为0.5~5.0%、pH值为5.0~9.0、酶解时间为0.5~4h；待反应完成后，用三氯乙酸调节溶液的pH值至2.0~3.0之间，低温下静置过夜，离心，弃去沉淀收集清液；然后在清液中加入相当于溶液体积1/3~1/5的正丁醇试剂，搅拌20-30min后，离心分离，弃去正丁醇层，水层即为脱除了蛋白质的多糖溶液。

6.根据权利要求１所述的方法，其特征在于当采用1mg/mL菠萝蛋白酶时，所述优化的脱蛋白工艺为菠萝蛋白酶的酶底比为4.5%，pH值为5.5，酶解温度为45℃、酶解时间为0.5h；当酶解完成后，采用三氯乙酸调节溶液的pH值为2.0，在4℃静置过夜后，离心分离，弃去沉淀，收集清液；然后在清液中加入相当于溶液体积1/5的正丁醇试剂，搅拌20min后，离心分离，弃去正丁醇层，水层即为脱除了蛋白质的多糖溶液；经此处理后，啤酒花粗多糖的蛋白脱除率为90%左右，多糖保留率为80%左右。