[发明专利]一种淋球菌免疫抑制突变基因ΔopaI及其突变方法

权利要求书

1.一种淋球菌突变免疫抑制基因ΔopaI，它的核苷酸序列如SEQ ID NO.10所示。

2.一种淋球菌突变免疫抑制基因ΔopaI的突变方法，其特征在于，以淋球菌基因组DNA为模板，PCR扩增opaI基因上游和下游侧翼区DNA片段，二者之间插入卡那霉素抗性基因Kanr，得到的突变基因ΔopaI。

3.根据权利要求2所述的突变方法，其特征在于，步骤如下：

（1）opaI基因的克隆：以淋球菌基因组DNA为模板，以 SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2的序列为引物通过PCR扩增出如SEQ ID NO.3所示淋球菌opaI基因；

（2）opaI上下游两侧侧翼区的扩增;将上述：以上述（1）opaI基因扩增产物与T载体pMD-19连接，并以连接产物为模板，以SEQ ID NO.4和SEQ ID NO.5为引物，扩增得到包含opaI基因两侧侧翼区的一个线性片段SEQ ID NO.6；

（3）以质粒pET-28a(+)为模板，以SEQ ID NO.7和SEQ ID NO.8为引物扩增得到Kanr基因序列SEQ ID NO.9；

（4）opaI基因的插入突变

将SEQ ID NO.6和SEQ ID NO.9的DNA片段分别用Mlu I和Xho I双酶切，并回收纯化；二者用T4连接酶进行连接，获得的环形DNA片段即为突变基因ΔopaI和pMP-19载体骨架，命名为pMD19ΔopaI，其中ΔopaI序列如SEQ ID NO.10所示。