[发明专利]一种无假阳性转基因小麦的生产方法

权利要求书

1.一种生产转基因植物的方法，包括如下步骤：

1)将目的DNA导入植物盾片中，培养，得到愈伤组织；

2)切割步骤1)得到的愈伤组织，得到愈伤组织块；

3)将步骤2)得到的愈伤组织块依次进行诱导筛选培养、再生筛选培养、后期筛选培养，得到生根转基因植物，即为目的转基因植物。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：

步骤1)按照如下方法操作：用基因枪将所述目的DNA导入植物盾片中，得到轰击后的组织，再将所述轰击后的组织在诱导筛选培养基中进行预诱导筛选培养，得到愈伤组织；

所述诱导筛选培养基按照如下方法制备：将2，4-D、G418和MS培养基混合，得到诱导筛选培养基，所述2，4-D在所述诱导筛选培养基中的浓度为2mg/L，所述G418在所述诱导筛选培养基中的浓度为30mg/L；

步骤2)中，所述愈伤组织块直径为0.8mm-1.2mm；

步骤3)中，所述诱导筛选培养为将步骤2)得到的愈伤组织块在所述诱导筛选培养基中诱导筛选培养，得到诱导筛选后的愈伤组织；

所述再生筛选培养为将所述诱导筛选后愈伤组织在再生筛选培养基中再生筛选培养，得到再生外植体；

所述再生筛选培养基按照如下方法制备：将KT、G418和MS培养基混合，得到再生筛选培养基，所述KT在所述再生筛选培养基中的浓度为2mg/L，所述G418在所述再生筛选培养基中的浓度为30mg/L。

所述后期筛选培养为将所述再生外植体在后期筛选培养基中后期筛选培养，得到生根的转基因植物；

所述后期筛选培养基按照如下方法制备：将G418和MS培养基混合，得到后期筛选培养基，所述G418在所述筛选培养基中的浓度为30mg/L。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于：

步骤1)中，所述基因枪采用的金粉浓度为100ug/枪，所述目的DNA的浓度为1ug/ul，所述基因枪的轰击距离9cm，所述金粉粒度为0.6um或1.0um；

步骤1)中，所述预诱导筛选培养的时间为10天，所述预诱导筛选培养的温度为25℃-27℃，所述预诱导筛选培养为暗培养；

步骤2)中，所述愈伤组织块直径为0.8mm、1mm或1.2mm；

步骤3)中，所述诱导筛选培养的时间为20天-25天，所述诱导筛选培养的温度为24℃-26℃，所述诱导筛选培养为暗培养；

所述再生筛选培养的时间为7天，所述再生筛选培养的温度为24℃-26℃，所述再生筛选培养为连续光照培养；所述再生筛选培养的光照1000Lux-1500Lux；

所述后期筛选培养的时间为20天-25天，所述后期筛选培养的温度为24℃-26℃，所述再生筛选培养为连续光照培养；所述后期筛选培养的光照1000Lux-1500Lux。

4.根据权利要求1-3中任一所述的方法，其特征在于：

在步骤1)前，还包括将所述植物盾片依次进行脱分化培养和渗透培养的步骤；

所述脱分化培养为所述植物盾片在脱分化培养基中脱分化培养，得到的脱分化处理后愈伤组织；

所述脱分化培养基按照如下方法制备：将2，4-D、特美汀和MS培养基混合，得到脱分化培养基，所述2，4-D在所述脱分化培养基中的浓度为2mg/L，所述特美汀在所述脱分化培养基中的浓度为150mg/L；

所述渗透培养为将所述脱分化处理后愈伤组织在渗透培养基中渗透培养得到渗透处理后愈伤组织；

所述渗透培养基按照如下方法制备：将2，4-D、特美汀、山梨醇、甘露醇和MS培养基混合，得到渗透培养基，所述2，4-D在所述渗透培养基中的浓度为2mg/L，所述特美汀在所述渗透培养基中的浓度为150mg/L，所述山梨醇在所述渗透培养基中的浓度为0.2M，所述甘露醇在所述渗透培养基中的浓度为0.2M；

在所述筛选培养得到生根转基因植物的步骤后，还包括将所述生根转基因植物进行壮苗培养的步骤。