[发明专利]基于多重放大系统的检测玉米赤霉烯酮的方法

权利要求书

1.一种基于多重放大系统的检测玉米赤霉烯酮的方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤一，将ZEN半抗原与OVA偶联，得到偶联物ZEN-OVA，再与biotin偶联，得到偶联物OVA-ZEN-biotin；

步骤二，将抗ZEN单克隆抗体与免疫磁珠结合，得到抗体-磁珠结合物；

步骤三，将所述抗体-磁珠结合物加入EP管中，用洗涤液洗涤，对待侧样品进行萃取，将待侧样品的萃取液稀释后加入上述管中，震荡；

步骤四，去除上清液，用洗涤液洗涤，再加入所述OVA-ZEN-biotin，震荡；

步骤五，去除上清液，用洗涤液洗涤，再加入SA-HRP，震荡；

步骤六，去除上清液，用洗涤液洗涤，加入发光底物，震荡，测定发光值；

步骤七，根据已知不同浓度ZEN与抗玉米赤霉烯酮单克隆抗体加入后得到的发光值，制作标准曲线，再根据待测样品的发光值，通过标准曲线得到样品中的ZEN浓度。

2.如权利要求1所述的检测玉米赤霉烯酮的方法，其特征在于，在所述步骤一中，所述ZEN半抗原与所述OVA的偶联通过活泼酯法完成。

3.如权利要求1所述的检测玉米赤霉烯酮的方法，其特征在于，在所述步骤一中，所述偶联物ZEN-OVA与所述biotin的偶联通过活泼酯法完成。

4.如权利要求1所述的检测玉米赤霉烯酮的方法，其特征在于，在所述步骤三中，所述洗涤液为pH为7.4的0.01M磷酸盐缓冲液。

5.如权利要求1所述的检测玉米赤霉烯酮的方法，其特征在于，在所述步骤三中，所述萃取液的稀释倍数为5倍。

6.如权利要求1所述的检测玉米赤霉烯酮的方法，其特征在于，在所述步骤三中，所述萃取的方法为：取样品，按照重量体积比1∶10的比例加入70％甲醇-PBS溶液，剧烈震荡15min，静置30min，将上清液通过快速定性滤纸过滤，即得萃取液。

7.如权利要求6所述的检测玉米赤霉烯酮的方法，其特征在于，所述稀释液为pH 8.2的0.1M磷酸缓冲液，所述磷酸缓冲液含有体积比为0.01％的Tween-20。

8.如权利要求1所述的检测玉米赤霉烯酮的方法，其特征在于，在所述步骤三中，所述震荡步骤为室温震荡30分钟。

9.如权利要求1所述的检测玉米赤霉烯酮的方法，其特征在于，在所述步骤六中，所述震荡步骤为室温震荡1分钟。

10.如权利要求1至9任一项所述的检测玉米赤霉烯酮的方法，其特征在于，在所述步骤七中，所述标准曲线的做法为：以加入ZEN浓度的对数值为横坐标，以加入不同浓度ZEN所得到的不同发光值除以不加入ZEN所得到的发光值为纵坐标，通过MicrosoftExcel软件，做出散点图并添加趋势线公式和R²。