[发明专利]一种酪酸梭菌及酪酸梭菌饲料添加剂及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种酪酸梭菌及酪酸梭菌饲料添加剂，属于微生物发酵领域。

背景技术

酪酸梭菌又名丁酸梭菌，是一种革兰氏阳性厌氧内生芽胞杆菌。芽抱巨大，生成芽袍后或一端膨大成鼓锤状，或中部膨胀成纺锤状或梭状。对禽畜无毒害作用;通过动物消化道中的生物竞争排斥作用，可抑制肠道有害菌，促进有益菌生长;能减少肠内氨、胺含量，减少肝脏负担;产生多种维生素和微量元素;产生多种酶类，提高饲料利用率，促进动物生长。作为微生态制剂功效显著，并能与抗生素配伍使用。酪酸梭菌现主要利用液体深层静置培养技术，此方法产品率高但生产成本高昂，对设备环境的要求高，其固态发酵培养方法稀见报道。

发明内容

  本发明的目的在于克服现有技术成本高昂，生产条件苛刻的劣势，提供一种工业化生产低廉、对生产条件不苛刻，且具有促生长功能的酪酸梭菌及酪酸梭菌饲料添加剂。

    为了达到上述目的，本发明提供了一种酪酸梭菌及酪酸梭菌饲料添加剂的制备方法，其特征在于，采用酪酸梭菌（菌种保藏在中国工业微生物菌种保藏管理中心，编号为CICC20036，种名butyricum，属名Clostridium，历史来源于四川省食品发酵工业研究设计院（1.265）），具体步骤如下：

第一步：将胰蛋白胨 2-2.5g，牛肉浸膏 1-1.5g，酵母膏0.6-1.0g，葡萄糖0.4-0.5g，磷酸氢二钾 0.2-0.3g，磷酸二氢钾 0.1-0.3g，硫酸镁 0.04-0.06g，氯化钙 0.02-0.05g，硫酸亚铁 0.01-0.05g，半胱氨酸盐酸盐 0.05-0.1g，蒸馏水 100ml，配制成液体种子专用培养基，将PH值调节至7.2-7.4；将冻藏的酪酸梭菌菌种接入培养基，37-40℃静置厌氧培养18-25h，进行种子活化；

第二步：将以质量百分比计的氮源20-30%、碳源10-15%、碳酸钙0.05-0.1%、硫酸镁0.05-0.1%、氯化钙0.1-0.2%及剩余的水配制成固态厌氧发酵培养基；

第三步：将第一步得到的种子液接入第二步得到的固态厌氧发酵培养基中进行固态发酵；

第四步：将第三步得到的产品进行低温烘干，粉碎，过筛，计量，包装，制得成品。

优选地，所述的第二步中的氮源为菜籽粕、豆粕、花生粕、玉米胚芽粕及棉籽粕中的任意一种或两种以上的混合物。

进一步地，所述的第二步中的氮源，在作为固态发酵培养基前，先灭菌，并用中性蛋白酶进行前处理；氮源与水重量比为1:1.5-2，中性蛋白酶以1000-1500μg/g加入到氮源与水的混合物中，酶解处理3-5h。

优选地，所述的第二步中的碳源为麸皮、米糠及玉米粉中的任意一种或两种以上的混合物与质量百分比为10%的糖蜜的混合物。

优选地，所述的第三步中的种子液的接种量的质量百分比为5-15%，培养温度为36-40℃，静置固态厌氧发酵时间为45-55h。

优选地，所述的第四步中的低温烘干的温度为38-42℃，烘干至水分的质量百分比低于8%，所述过筛的孔目为1.0目筛网。

本发明利用低廉的碳氮源基质，提供一种新型的酪酸梭菌大规模工业化生产方法，有效降低成本，增加工厂效益。

附图说明

   图1为本发明固体厌氧发酵接种量对酪酸梭菌活菌数及芽孢浓度的影响的数据图；

 图2为本发明固体厌氧发酵时间对酪酸梭菌活菌数及芽孢浓度的影响的数据图；

   图3为本发明固体厌氧发酵温度对酪酸梭菌活菌数及芽孢浓度的影响的数据图。

具体实施方式

下面通过具体实施例对本发明作进一步说明。

实施例1

选用豆粕作为氮源；90wt%麸皮与10wt%糖蜜的混合物作为碳源。

步骤一，发酵菌体种子制备及种子活化：

1、配制液体种子专用培养基，其中胰蛋白胨 2.5g，牛肉浸膏 1.5g，酵母膏0.6g，葡萄糖0.4g，磷酸氢二钾 0.2g，磷酸二氢钾 0.1g，硫酸镁 0.04g，氯化钙 0.02g，硫酸亚铁 0.01g，半胱氨酸盐酸盐 0.05g，蒸馏水 100ml，调节pH 7.2。

2、将冻藏的酪酸梭菌菌种接入培养基，37℃静置厌氧培养18h。

步骤二，固态厌氧发酵培养基制备：

3、先将氮源灭菌，利用中性蛋白酶进行前处理；氮源加水重量比为1:2，中性蛋白酶以1000μg/g加入氮源与水的混合物中，酶解处理3h。