[发明专利]一种养血清脑颗粒蒽醌类成分检测方法

权利要求书

1.一种养血清脑颗粒蒽醌类成分检测方法，包括以下步骤：

步骤1，对照品溶液的制备；

步骤2，供试品溶液的制备；

步骤3，注入液相色谱-质谱联用色谱仪，得到色谱图；

步骤4，根据色谱图得到供试品溶液中蒽醌类成分的种类。

2.根据权利要求1的检测方法，其中步骤1所述对照品采用橙黄决明素、芦荟大黄素、大黄素和大黄酚。

3.根据权利要求2的检测方法，其中步骤1所述对照品溶液的制备，步骤如下：称取对照品橙黄决明素5.1mg，芦荟大黄素2.85mg，大黄素5.01mg，大黄酚4.18mg，置于100ml容量瓶中，用甲醇定容至刻度，摇匀，用0.22μm微孔滤膜过滤，取续滤液作为对照品溶液。

4.根据权利要求1的检测方法，其中步骤2所述供试品溶液采用D101大孔树脂柱和聚酰胺柱制备。

5.根据权利要求4的检测方法，其中步骤2所述供试品溶液的制备，步骤如下：称取未加入辅料的养血清脑颗粒浸膏100g，用20％的乙醇溶解，以D101大孔树脂柱层析分离，5bv 20％乙醇、5bv 95％乙醇分别洗脱，收集95％乙醇洗脱液，将可能的药效物质进行富集；将95％乙醇洗脱液浓缩，用30％乙醇溶液溶解，以100-200目的聚酰胺柱层析分离，5bv 30％乙醇、5bv 95％乙醇分别洗脱，收集95％乙醇洗脱液即为目标蒽醌部位。

6.根据权利要求5的检测方法，其中色谱条件如下：

液相条件：色谱柱PhenomenexC₁₈(250×4.60mm，Gemini 5μm)；流动相A为乙腈，流动相B为0.5％的甲酸-水，采用梯度洗脱；体积流量为1.0ml/min，检测波长为254nm，190-500nm全波长扫描，柱温为30℃，进样量10μl。

7.根据权利要求6的检测方法，其中质谱条件：检测模式为电喷雾离子化方式，检测离子为正、负离子，扫描范围100-1000m/z，干燥气的流量为8L/min，干燥气的温度为350℃，雾化气的压力为35psi。

8.根据权利要求7的检测方法，其中流动相梯度洗脱程序如下： 

。

9.根据权利要求8的检测方法，包括以下步骤：

步骤1，对照品溶液的制备

称取对照品橙黄决明素5.1mg，芦荟大黄素2.85mg，大黄素5.01mg，大黄酚4.18mg，置于100ml容量瓶中，用甲醇定容至刻度，摇匀，用0.22μm微孔滤膜过滤，取续滤液作为对照品溶液；

步骤2，供试品溶液的制备

称取未加入辅料的养血清脑颗粒浸膏100g，用20％的乙醇溶解，以D101大孔树脂柱层析分离，5bv 20％乙醇、5bv 95％乙醇分别洗脱，收集95％乙醇洗脱液，将可能的药效物质进行富集；将95％乙醇洗脱液浓缩，用30％乙醇溶液溶解，以100-200目的聚酰胺柱层析分离，5bv 30％乙醇、5bv 95％乙醇分别洗脱，收集95％乙醇洗脱液即为目标蒽醌部位；

步骤3，注入色谱仪，得到色谱图，色谱仪为液相色谱-质谱联用仪器，色谱条件如下：

液相条件：色谱柱PhenomenexC₁₈(250×4.60mm，Gemini 5μm)；流动相A为乙腈，流动相B为0.5％的甲酸-水，梯度洗脱见表；体积流量为1.0ml/min，检测波长为254nm，190-500nm全波长扫描，柱温为30℃，进样量10μl，

质谱条件：检测模式为电喷雾离子化方式，检测离子为正、负离子，扫描范围100-1000m/z，干燥气的流量为8L/min，干燥气的温度为350℃，雾化气的压力为35psi，

流动相梯度洗脱程序

步骤4，根据色谱图得到供试品溶液中蒽醌类成分的种类。

10.根据权利要求9的方法，其中还包括对其中的橙黄决明素、芦荟大黄素及大黄素三个物质含量进行测定的步骤。