[发明专利]纤维状脱钙骨基质的制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及纤维状脱钙骨基质的改善的制备方法，具体地，涉及包括部分脱钙、切割、完全脱钙及粉碎步骤的纤维状脱钙骨基质的改善的制备方法。

背景技术

将骨浸渍在酸中去除骨中的矿物质成分的部分称为脱钙骨基质（demineralized bone matrix，DBM）。脱钙骨基质大部分由高度交联的骨胶原构成，残存的非骨胶原性蛋白质包括转化生长因子-β（TGF–β）、血小板源性生长因子（PDGF）、骨桥蛋白、骨粘连蛋白、骨形态生成蛋白（bone morphogenetic protein，BMP）等。脱钙骨基质以用于修复骨缺损等为目的的骨移植用组合物的形态使用。

脱钙骨基质对分离到体外的骨进行脱钙步骤之后，将此粉碎为适当的大小，制备成颗粒形态。本发明发明人公开过具有0.05-250μm颗粒大小的脱钙骨基质；具有250-2000μm的颗粒大小的脱钙骨基质；及以特定比例混合水合物的骨再生用组合物，所述组合物具有优异的注入性及形态维持性（处理性）（韩国授权专利第10-1041784号）。

另外，皮质骨（cortical bone）平行于骨的长轴并由骨胶原纤维束（fiber bundles）构成，已知由此得到的纤维状脱钙骨基质在骨修复及其它整形外科的移植方面具有有用的性质。纤维状脱钙骨基质通过将分离到体外的皮质骨利用特殊粉碎机（例如，美国专利第5,607,269号）粉碎至得到纤维状颗粒，然后进行脱钙而制备。但是这种制备方法由于受到粉碎仪器的机械方面的限制，只能使用天然的皮质轴（intact cortical shafts）作为骨原料，且得到的纤维状脱钙骨收率低。为了改善上述问题，美国专利第7,323,193号及第7,939,108号中公开了将分离到体外的骨切断成适当大小，并在酸性溶液中进行6小时的脱钙后，再在酸性溶液中进行2天的脱钙，然后将其进行粉碎，从而制备纤维状脱钙骨基质的方法。但是上述美国专利第7,323,193号及第7,939,108号中公开的制备方法，需要进行长达2日，即48小时的长时间的脱钙步骤。

发明内容

发明目的

本发明发明人为了开发出具有有用的性质的纤维状脱钙骨基质的制备方法，尤其是能够改善长时间的脱钙步骤的制备方法，进行了多种研究。结果将部分脱钙而得到的骨进行切割制备成薄片状形态后，将此进行脱钙时，惊奇地发现能够将脱钙步骤显著缩短至约6小时左右，且脱钙骨基质具有纤维状形态的同时能够以高收率获得。

从而，本发明的目的在于通过依次进行部分脱钙、切割、完全脱钙及粉碎步骤的纤维状脱钙骨基质的制备方法。

技术方案

本发明涉及一种纤维状脱钙骨基质的制备方法，其包括下述步骤：（a）将分离到体外的骨在酸性溶液中进行1-5小时的第1次脱钙；（b）将从步骤（a）得到的骨切割（slicing）成0.1-3mm厚的片状骨；（c）将从步骤（b）得到的片状骨在酸性溶液中进行2-6小时的第2次脱钙；及（d）将从步骤（c）得到的经过脱钙的骨进行粉碎。

根据本发明的纤维状脱钙骨基质的制备方法，所述步骤（a）和步骤（c）的所述酸性溶液可以相互独立地为0.1-3N的HCl水溶液，优选所述步骤（a）和步骤（c）的所述酸性溶液可以为0.6N的HCl水溶液。此外，可以以获得具有1000-5000μm范围长度的纤维状脱钙骨基质来实施所述粉碎。

发明效果

根据本发明，依次进行部分脱钙、切割、完全脱钙及粉碎步骤时，发现能够将脱钙步骤显著缩短至约6小时左右。尤其通过引入切割步骤，不仅缩短了脱钙步骤的时间，而且还能够使最终得到的脱钙骨基质以具有纤维形态的脱钙骨基质高收率地获得。因此，本发明的制备方法能够适用于工业规模的大量生产。

附图说明

图1是表示将部分脱钙的骨进行切割后得到的骨（A）及将脱钙的骨进行粉碎后得到的骨（B）。

图2是表示纤维状脱钙骨基质（A）和颗粒状脱钙骨基质（B）的形态的光学显微镜测定照片。

具体实施方式

本发明提供一种纤维状脱钙骨基质的制备方法，其包括下述步骤：（a）将分离到体外的骨在酸性溶液中进行1-5小时的第1次脱钙；（b）将从步骤（a）得到的骨切割成0.1-3mm厚的片状骨；（c）将从步骤（b）得到的片状骨在酸性溶液中进行2-6小时的第2次脱钙；及（d）将从步骤（c）得到的经过脱钙的骨进行粉碎。