[发明专利]中和抗甲型流感病毒抗体及其用途

说明书

背景技术

对甲型流感病毒的中和抗体应答对给定病毒亚型通常是特异性的。有16种由它们的血凝素(“HA”)蛋白限定的甲型流感亚型。这16种HA（H1 　H16）可被分成两组。组1由H1、H2、H5、H6、H8、H9、H11、H12、H13和H16亚型组成，组2包括H3、H4、H7、H10、H14和H15亚型。虽然所有的亚型均存在于鸟类中，但主要是H1、H2和H3亚型在人中引起疾病。H5、H7和H9亚型正在人中引起散发性严重感染并且可能会产生新的大流行。H1和H3病毒不断地进化从而产生新的变体，这种现象被称为抗原漂移。因此，响应以前的病毒而产生的抗体针对新的漂移病毒的保护性差或没有保护性。结果是，必须每年产生对抗预计会出现的H1和H3病毒的新疫苗，该过程十分昂贵并且也不总是有效。这同样适用于H5流感疫苗的制备。实际上，还不清楚基于越南或印度尼西亚甲型流感病毒分离株的现有H5疫苗是否将能对抗将来的流行性H5病毒。

因为这些原因，将非常期望具有可诱导能够中和所有甲型流感病毒亚型以及它们每年的变体的广谱中和抗体（Gerhard等人2006年进行了综述）。此外，广谱中和异亚型抗体可作为药物施用来预防或治疗甲型流感感染。对于这类药物的制造，选择以高滴度产生以降低生产成本的抗体是重要的。

已经表征了识别甲型流感病毒的抗体。针对M2（在受感染的细胞上表达但不在感染病毒上表达的一种小蛋白质）的抗体已经显示出一定的体内保护性效果，可能是通过靶向受感染细胞来通过NK细胞或细胞毒性T细胞破坏。还可能用中和抗体靶向HA蛋白。HA作为同型三聚体前提多肽HA0合成。每个单体可独立地在翻译后切割而形成两条多肽即HA1和HA2，通过单个二硫键连接。较大的N末端片段（HA1，320-330个氨基酸）形成含有受体结合位点和大部分被病毒中和抗体识别的决定簇的膜远端球形结构域。HA的HA1多肽负责病毒与细胞表面的吸附。较小的C末端部分（HA2，≈180个氨基酸）形成将该球形结构域锚定至细胞或病毒膜的茎状结构。HA2多肽介导病毒和细胞膜在核内体中融合，从而释放核糖核蛋白复合物释放进细胞质中。

亚型之间的序列同源性的程度在HA1多肽（亚型之间34%　59%的同源性）比在HA2多肽（51%　80%同源性）中小。最保守的区域是切割位点周围的序列，特别是HA2N末端11个氨基酸，称为融合肽，其在所有甲型流感病毒亚型中是保守的。部分该区域暴露为HA前体分子(HA0)中的表面环区(loop)，但当HA0被切割成HA1/HA2时变成不可接近。概括地说，不同HA亚型中，尤其是在HA1-HA2连接区和在HA2区中都有保守区。然而这些区域对于中和抗体可能是不易接近的。

在鉴别中和不止一种亚型的甲型流感病毒的抗体方面仅取得有限的成功。另外，迄今所鉴别的抗体的中和作用的迹象窄并且其效价低。Okuno等人用甲型流感病毒/Okuda/57(H2N2)免疫小鼠并分离了单克隆抗体(C179)，该单克隆抗体结合HA2中的保守构象表位并在动物模型中在体外和体内中和组1的H2、H1和H5亚型甲型流感病毒（Okuno等人，1993；Smirnov等人，1999；Smirnov等人，2000）。

Gioia等人描述了在接受了常规季节性流感疫苗的某些个体的血清中存在H5N1病毒中和抗体（Gioia等人，2008）。该作者提出，中和活性可能是由于神经氨酸苷酶(N1)的抗体。然而，未分离单克隆抗体并且未表征靶表位。另外，尚未清楚该血清抗体是否中和其他亚型的甲型流感病毒。

已经从免疫供体的记忆B细胞和浆细胞分离了可结合HA的茎状区中的表位并且能够中和组1或组2中的一些甲型流感病毒亚型的异亚型人抗体。然而，至今尚未发现靶向在所有16个亚型上保守的HA三聚体中的表位并且能够中和组1和组2亚型二者的病毒的甲型流感特异性中和抗体，并且它们的分离仍是治疗方法和疫苗设计的主要目标。

尽管进行了数十年的研究，但还没有投入市场的广谱中和或抑制甲型流感病毒感染或缓解甲型流感病毒引起的疾病的抗体。因而，需要鉴别中和多种亚型的甲型流感病毒并且可作为药物用于预防或治疗甲型流感感染的新抗体。还需要鉴别以高滴度产生以降低生产成本的抗体。

发明内容

本发明部分基于从接种了季节性流感疫苗的个体分离出可结合HA并中和不止一种亚型的甲型流感病毒的感染的自然产生的人单克隆抗体以及本发明抗体结合的新表位。因此，在本发明的一个方面，本发明包括中和选自组1和组2亚型的不止一种亚型的甲型流感病毒的感染的抗体及其抗原结合片段。