[发明专利]用于产生发酵产物的工艺

权利要求书

1.一种用于从含淀粉材料产生发酵产物的工艺，其包括下述步骤：

i)在80至90℃范围的温度、4.5至5.0范围的pH使用下述来液化含淀粉材料：

-α-淀粉酶，其在pH 4.5、85℃、0.12mM CaCl₂具有至少10的T1/2min，是SEQ ID NO:1所示的嗜热脂肪芽孢杆菌α-淀粉酶的变体，与SEQ ID NO:1的成熟部分具有至少99％、但少于100％的同一性，并具有如下突变：

-I181*+G182*+N193F+E129V+K177L+R179E；

-蛋白酶，其具有超过20％的热稳定性值，所述热稳定性值是作为80℃/70℃的相对活性确定的，其中所述蛋白酶是来源于激烈火球菌(Pyrococcus furiosus)的菌株的蛋白酶，所述蛋白酶是与SEQ ID NO:13具有至少99％的同一性的蛋白酶；

ii)使用糖源生成酶进行糖化；

iii)使用发酵生物进行发酵。

2.权利要求1的工艺，其中所述α-淀粉酶是是截短的，截短为具有491个氨基酸。

3.权利要求1的工艺，进一步地，其中在液化步骤i)过程中存在和/或添加葡糖淀粉酶，其中所述葡糖淀粉酶在85℃、pH 5.3具有至少30％的热稳定性。

4.权利要求3的工艺，其中所述葡糖淀粉酶是来源于草酸青霉的菌株的葡糖淀粉酶的变体，使用SEQ ID NO:14中所示的成熟序列进行编号，其具有K79V取代，此外与SEQ ID NO:14中所示的成熟多肽具有至少99％的同一性。

5.权利要求1-4中任一项的工艺，进一步地，其中在糖化和/或发酵过程中存在和/或添加葡糖淀粉酶，其中所述葡糖淀粉酶是真菌来源的。

6.权利要求1-4中任一项的工艺，进一步地，其中在糖化和/或发酵过程中存在和/或添加葡糖淀粉酶，其中所述葡糖淀粉酶来自黑曲霉(A.niger)、泡盛曲霉(A.awamori)或米曲霉(A.oryzae)的菌株；或里氏木霉(T.reesei)的菌株；或埃默森踝节菌(T.emersonii)的菌株。

7.权利要求1-4中任一项的工艺，进一步地，其中在液化和/或糖化过程中存在普鲁兰酶。

8.一种组合物，其包含α-淀粉酶和蛋白酶，其中

i)所述α-淀粉酶在pH 4.5、85℃、0.12mM CaCl₂具有至少10的T1/2min，是SEQ ID NO:1所示的嗜热脂肪芽孢杆菌α-淀粉酶的变体，与SEQ ID NO:1的成熟部分具有至少99％、但少于100％的同一性，并具有如下突变：

-I181*+G182*+N193F+E129V+K177L+R179E；

ii)所述蛋白酶具有超过20％的热稳定性值，所述热稳定性值是作为80℃/70℃的相对活性确定的，其中所述蛋白酶是来源于激烈火球菌(Pyrococcus furiosus)的菌株的蛋白酶，所述蛋白酶是与SEQ ID NO:13具有至少99％的同一性的蛋白酶。

9.权利要求8的组合物，其中所述α-淀粉酶是截短的，截短为具有491个氨基酸。

10.权利要求8的组合物，进一步地，其中所述组合物包含细菌来源的第二α-淀粉酶，其在pH 4.5、85℃、0.12mM CaCl₂具有少于10的T1/2min。

11.权利要求8的组合物，其中所述蛋白酶具有作为80℃/70℃的相对活性确定为超过80％的热稳定性。

12.权利要求8的组合物，其进一步包含葡糖淀粉酶，其在85℃、pH5.3具有至少20％的相对活性热稳定性，是来源于草酸青霉的菌株的葡糖淀粉酶变体，使用SEQ ID NO:14中所示的成熟序列进行编号，其在SEQ ID NO:14中具有K79V取代，与SEQ ID NO:14中所示的成熟多肽具有至少99％的同一性。

13.权利要求8的组合物，进一步包含普鲁兰酶。