[发明专利]新型岩藻糖基转移酶及其应用

权利要求书

1.编码具有α-1,2-岩藻糖基转移酶活性的多肽并且包括选自由以下各项组成的组中的序列的多核苷酸：

a)随附序列表中的SEQ ID No.1；

b)与SEQ ID No.1互补的核酸序列；

c)在严格条件下与a)和b)中限定的所述核酸序列或它们的互补链杂交的核酸序列。

2.根据权利要求1所述的多核苷酸，由编码具有α-1,2-岩藻糖基转移酶活性的多肽的SEQ ID No.1组成。

3.载体，包含根据权利要求1或2所述的编码具有α-1,2-岩藻糖基转移酶活性的多肽的核酸序列，所述核酸序列可操作地连接至由所述载体转化的宿主细胞识别的控制序列。

4.一种具有α-1,2-岩藻糖基转移酶活性的多肽，由选自以下组中的氨基酸序列组成，所述组由以下各项组成：

(a)在SEQ ID No.2中所示的氨基酸序列；

(b)在SEQ ID No.2中所示的所述氨基酸序列的等位基因变体的氨基酸序列，其中，所述等位基因变体由核酸分子编码，所述核酸分子在严格条件下杂交至在SEQ ID No.1中所示的核酸分子的相反链；

(c)在SEQ ID No.2中所示的所述氨基酸序列的同源体的氨基酸序列，其中，所述同源体由核酸分子编码，所述核酸分子在严格条件下杂交至在SEQ ID No.1中所示的所述核酸分子的相反链；以及

(d)在SEQ ID No.2中所示的氨基酸序列的片段，其中，所述片段包括至少10个连续的氨基酸。

5.宿主细胞，包含根据权利要求3所述的载体、或者包含由根据权利要求1或2所述的多核苷酸组成的序列，其中，所述序列是所述宿主细胞的外源序列，以及其中，所述序列整合在所述宿主细胞的基因组中。

6.根据权利要求5所述的宿主细胞，其特征在于，所述宿主细胞选自由包括酵母菌的真菌、细菌、昆虫、动物细胞、和植物细胞所组成的组中。

7.根据权利要求5或6所述的宿主细胞，其特征在于，所述宿主细胞是大肠杆菌细胞。

8.根据权利要求5至7中任一项所述的宿主细胞，其特征在于，编码具有α-1,2-岩藻糖基转移酶活性的所述多肽的所述核酸适合各细胞的密码子使用。

9.根据权利要求1或2所述的多核苷酸、或根据权利要求3所述的载体、或根据权利要求4所述的多肽在生产岩藻糖基化寡糖、(糖)蛋白和/或(糖)脂中的应用。

10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于，所述岩藻糖基化寡糖、(糖)蛋白和/或(糖)脂的生产通过编码所述α-1,2-岩藻糖基转移酶的所述多核苷酸的异源或同源表达进行。

11.根据权利要求9或10所述的应用，其特征在于，所述岩藻糖基化寡糖是已知来自于母乳中的寡糖。

12.根据权利要求11所述的应用，其特征在于，所述岩藻糖基化寡糖是2’-岩藻糖基乳糖。

13.用于生产岩藻糖基化寡糖、(糖)蛋白、和(糖)脂的方法，包括以下步骤：

a.提供根据权利要求4所述的具有α-1,2-岩藻糖基转移酶活性的多肽，

b.在所述多肽催化岩藻糖残基从供体底物转移至受体底物的条件下，使步骤a中的具有α-1,2-岩藻糖基转移酶活性的所述多肽与包括所述供体底物和所述受体底物的混合物接触，所述供体底物包括岩藻糖残基，所述受体底物包括单糖或寡糖、(糖)蛋白、或(糖)脂，由此生产岩藻糖基化寡糖、(糖)蛋白、或(糖)脂。

14.用于生产岩藻糖基化寡糖、(糖)蛋白、和(糖)脂的方法，包括以下步骤：

a.在允许生产所述岩藻糖基化寡糖、(糖)蛋白和/或(糖)脂的适宜营养条件、以及允许具有α-1,2-岩藻糖基转移酶活性的多肽表达的条件下，培养根据权利要求5至8中任一项所述的宿主细胞；

b.与步骤a同时或在步骤a之后，提供包括岩藻糖残基的供体底物以及包括单糖或寡糖、(糖)蛋白、或(糖)脂的受体底物，以使所述α-1,2-岩藻糖基转移酶多肽催化岩藻糖残基从所述供体底物转移到所述受体底物，由此生产岩藻糖基化寡糖、(糖)蛋白、或(糖)脂；以及

c.从所述宿主细胞或其生长培养基中分离所述岩藻糖基化寡糖、(糖)蛋白和/或(糖)脂。