[发明专利]用于抑制Hif1α表达的siRNA和含有其的抗癌组合物

说明书

技术领域

本发明涉及一种小干扰RNA（siRNA），其互补地结合至Hif1αmRNA转录本的碱基序列，从而在不激发免疫应答的情况下抑制Hif1α的表达，还涉及一种siRNA在预防和/或治疗癌症中的应用。

背景技术

Hif1（低氧诱导因子1）是一种含有Hif1α亚单位和Hif-1β亚单位的异质二聚体转录因子，其中Hif1α亚单位控制Hif1的实质活性，Hif-1β亚单位起到核转运体的作用。两种亚单位都是碱性螺旋-环螺旋-PAS（PER-ARNT-SIM）超级家族的成员。在常氧下，Hif1α迅速降解。当VHL（希佩尔-林道（von Hippel Lindau），一种E3泛素连接酶体系的识别组分）结合至ODD（氧降解域）的羟基脯氨酸（Pro594和Pro402）残基时，发生降解。然而，缺氧（含氧率5%或更少）是通常在各种实体癌中产生的现象，在缺氧时，这样的羟基化被抑制，从而Hif1α不降解，并且以二聚体的形式从细胞质向细胞核移动，且结合至HRE（缺氧反应元件），从而诱导有关血管生成、酶酵解、细胞生长和分化的基因的表达（Veronica A.等,Cancer Research,66(12),6264-70,2006;Semenza GL.等,Nature Review Cancer3,721-32,2003）。HIF-1活性的调控在多级水平上发生。

由于Hif1α活性的调控在多级水平上发生，因此使用靶向至Hif1αmRNA的siRNA而不是靶向至这些机制的途径来从根本上抑制Hif1α的表达被认为是最好的方法。

最近，研究显示核糖核酸介导的干扰（RNAi）通过用现有技术呈现序列特异基因沉默，甚至对不然不可药物控制靶基因，从而对候选先导药物的发展做出贡献。因此，RNAi被认为是能够为合成药物中有限的靶和非特异性问题提供解决方法、并且克服化学合成药物的限制的技术，因此，积极进行了很多使用RNAi开发各种疾病药物的研究，这些疾病使用现有技术难以治疗，特别是癌症。

核糖核酸介导的干扰（RNAi）是由21-25个碱基组成且具有双螺旋结构的核糖核酸互补地结合至靶基因的mRNA转录本并且降解转录本，从而抑制靶基因表达的一种现象（Novina&Sharp,Nature,430:161-164,2004）。

然而，发现siRNA（小干扰RNA）触发固有免疫应答，并且比期望更频繁地诱导非特异性RNAi效应。

据报道，在哺乳动物细胞中，长双链siRNA可能诱导有害干扰素应答，短双链siRNA可能诱导对人体或细胞有害的初始干扰素应答；已知许多siRNA比期望更高地诱导非特异性RNAi（Kleirman等人，Nature,452:591-7,2008）。

虽然已经尝试开发靶向至在癌症发展中起到重要作用的Hif1α的siRNA抗癌药物，但是目前为止收效甚微。不曾提出siRNA单个序列的基因抑制效果，尤其是不曾考虑过免疫活性。

虽然siRNA由于具有诸如高活性、优异的靶向特异性等优点而作为新型药物显示出极大的前景，但是在药物开发中需要克服几个障碍，例如：血液中的稳定性低，因为siRNA可能被血液中的核酸酶降解；通过细胞膜的能力低，因为带有负电；在血液中的半衰期短，因为排泄迅速由此组织分布有限；以及诱导能够影响其他基因的调控途径的脱靶效应。

发明内容

因此，本发明人开发了一种siRNA，其具有高序列特异性，因此特异性地结合至靶基因的转录本而提高RNAi活性并且不会诱导任何免疫毒性，从而完成了本发明。

一个实施方式提供了一种siRNA，其互补地结合至Hif1αmRNA转录本，从而特异性地抑制Hif1α的合成和/或表达。

另一个实施方式提供了抑制用于表达siRNA的表达载体。

另一个实施方式提供了一种用于抑制Hif1α的合成和/或表达的药物组合物，其包括作为活性成分的siRNA或siRNA表达载体。

另一个实施方式提供了一种抗癌组合物，其包括作为活性成分的siRNA或siRNA表达载体。