[发明专利]亲和色谱基质

权利要求书

1. 一种从液体中分离一种或多种含有免疫球蛋白的蛋白质的方法，所述方法包括：

(a)使液体与含有固定在支持物上的配体的分离基质接触；

(b)通过与所述配体相互作用使所述含有免疫球蛋白的蛋白质吸附到基质上；

(c)清洗吸附了含有免疫球蛋白的蛋白质的基质的任选步骤；

(d)通过使基质与释放蛋白质的洗脱液接触来回收所述含有免疫球蛋白的蛋白质；

改进在于每个所述配体包含葡萄球菌蛋白A (SpA) (E、D、A、B、C)或蛋白Z或其功能性变体的一个或多个结构域(单体)，其中在至少一个所述一个或多个单体中，对应于蛋白A的B结构域或蛋白Z的H18的位置上的天冬酰胺或组氨酸被取代为另一种氨基酸，以及其中所述配体与未取代的配体相比提供洗脱pH的增加，且具有基本上未改变的或改进的动态结合能力和收率。

2. 权利要求1的方法，其中所述蛋白A或蛋白Z的一个或多个结构域为来自相同的结构域E、D、A、B、C或蛋白Z的两个或更多个拷贝。

3. 权利要求1的方法，其中所述蛋白A或蛋白Z的一个或多个结构域为选自结构域E、D、A、B、C或蛋白Z的两个或更多个结构域。

4. 权利要求1的方法，其中所述蛋白A或蛋白Z的一个或多个结构域选自结构域B、结构域C或蛋白Z。

5. 权利要求1-4中任一项的方法，其中在多聚体配体的至少一个单体中，对应于蛋白A的B结构域或蛋白Z H18的位置上的天冬酰胺或组氨酸被取代为另一种氨基酸。

6. 权利要求1-5中任一项的方法，其中在多聚体配体的所有单体中，对应于蛋白A的B结构域或蛋白Z H18的位置上的天冬酰胺或组氨酸被取代为另一种氨基酸。

7. 权利要求1-6中任一项的方法，其中对应于蛋白A的B结构域或蛋白Z H18的位置上的天冬酰胺或组氨酸被取代为增加洗脱pH的另一种氨基酸。

8. 权利要求1-7中任一项的方法，其中对应于蛋白A的B结构域或蛋白Z H18的位置上的天冬酰胺或组氨酸被取代为丝氨酸。

9. 权利要求1-8中任一项的方法，其中所述配体与未取代的配体相比提供洗脱pH的增加达至少0.2。

10. 权利要求1-9中任一项的方法，其中所述配体与未取代的配体相比提供洗脱pH的增加达至少0.4。

11. 权利要求1-10中任一项的方法，其中所述配体提供洗脱pH增加到至少4.0，同时靶分子的收率为至少80%或优选>95%。

12. 权利要求1-11中任一项的方法，其中所述配体具有对免疫球蛋白的Fc部分的亲和力，但缺失对免疫球蛋白的Fab部分的亲和力。

13. 权利要求1-12中任一项的方法，其中将对应于蛋白A的B结构域的第29位上的甘氨酸残基替换为丙氨酸。

14. 权利要求1-13中任一项的方法，其中通过将至少一个天冬酰胺残基突变为非谷氨酰胺的氨基酸来使所述配体碱稳定。

15. 权利要求1-14中任一项的方法，其中所述配体为蛋白Z，其中通过将至少一个天冬酰胺残基突变为非谷氨酰胺的氨基酸来获得碱稳定性。

16. 权利要求15的方法，其中通过将至少第23位上的天冬酰胺残基突变为非谷氨酰胺的氨基酸来获得蛋白Z的碱稳定性。

17. 权利要求1-16中任一项的方法，其中所述多聚体为二聚体。

18. 权利要求1-16中任一项的方法，其中所述多聚体为四聚体。

19. 权利要求1-18中任一项的方法，其中所述含有免疫球蛋白的蛋白质为单克隆抗体。

20. 权利要求1-18中任一项的方法，其中所述含有免疫球蛋白的蛋白质为多克隆抗体。

21. 权利要求1-18中任一项的方法，其中所述含有免疫球蛋白的蛋白质为含有与另一种蛋白质融合的免疫球蛋白Fc部分的融合蛋白。