[发明专利]用于在哺乳动物中预防和治疗金迪普拉病毒感染的疫苗制剂

说明书

发明领域

本发明涉及用于在哺乳动物中预防和治疗金迪普拉病毒感染的疫苗制剂。更具体地，本发明提供用于向人类施用的免疫原性制剂，包含在稳定制剂中的经热、紫外线、伽玛辐照或化学灭活的金迪普拉病毒的完整病毒粒子或其纯化的病毒抗原。

发明背景

金迪普拉病毒(Chandipura virus，CHPV)是单股负链RNA病毒目(Mononegavirales)、弹状病毒科(Rhabdoviridae)、水泡性病毒属(Vesiculovirus)的成员。CHPV基因组结构与充分表征的水疱性口炎病毒(Vesiculo stomatitis virus，VSV)的相似。CHPV感染在儿童中引起通常是致命的脑炎。临床症状包括高烧、头痛、嗜睡、呕吐和导致昏迷的抽搐。因为尚没有对此病毒感染的疗法，多数患者住院24-48小时内死亡。

1965年在Nagpur高热疾病的爆发期间，金迪普拉病毒(CHPV)首次从患者的血清样本中分离出来。2003年，当此病毒在Andhra Pradesh(Rao等人，2004)和Maharashtra州引起大规模脑炎爆发时，CHPV首次获得公共卫生重要性。由CHPV引起的致死率在Andhra Pradesh州高达55％(Rao等人.2004)。据报道在印度Gujarat发生流行(Chadha等人.2005)期间的死亡率是78.4％的致命性。从那时起，此病毒感染已经再发生流行，并表现为广泛分布，如血清学调查在遍及印度以及也在斯里兰卡和非洲的人类和家养动物中鉴定到针对CHPV的中和抗体。此病毒还已从印度(Geevarghese等人.2005)和西非(Fontenille等人.1994)的白蛉(sandflies)中分离出。

没有可用于预防此病毒感染的疫苗。CHPV具有非分段的～11kb的负链RNA基因组。此病毒基因组的转录由病毒RNA依赖性RNA聚合酶所编码。CHPV基因组编码四种主要蛋白质，核衣壳蛋白(N蛋白)、磷蛋白(P蛋白)、基质蛋白(M蛋白)、糖蛋白(G蛋白)和大蛋白(L蛋白)。N蛋白衣壳化基因组RNA以保护它免受细胞RNA酶。所有弹状病毒的糖蛋白是N-糖基化I类跨膜蛋白，其在病毒表面上形成三聚体刺突。此由糖蛋白形成的刺突介导病毒向细胞受体的附着以便介导内吞作用以及与细胞膜的融合。糖蛋白引发中和抗体并且已被证明在小鼠中对大脑内此病毒的攻击提供保护效果(Venkateswarlu和Arankalle，2009)。对于预防金迪普拉病毒感染没有商业上可用的疫苗。对于CHPV感染的治疗没有特异性的疗法。

金迪普拉糖蛋白(G蛋白)是高免疫原性的并且提供针对金迪普拉病毒感染的保护性免疫反应。CHPV G蛋白已经作为分泌蛋白在杆状病毒感染的昆虫细胞中表达和纯化(Venkateswarlu和Arankalle，2009)。为了工业规模生产疫苗用杆状病毒介导重组蛋白的表达是昂贵的。至今，没有太多来源于杆状病毒感染的昆虫细胞的产品被商品化，把儿科部分作为目标的疫苗更是这样。因此，没有向是此疫苗的主要目标的婴儿和儿童施用杆状病毒来源疫苗的足够的安全记录。

我们用酵母，特别是巴斯德毕赤酵母(Pichia pastoris)作为金迪普拉糖蛋白(G蛋白)的表达系统，其提供了明显的经济优势，因为它适合于生产低成本和高效的疫苗。有很好的安全纪录，由于来源于酵母包括巴斯德毕赤酵母的许多商用产品已经被成功地商业化了。由来源于作为表达系统的巴斯德毕赤酵母的乙型肝炎小抗原组成的重组疫苗Revac-Bmcf已经被成功地商业化为用于两岁以下儿童的疫苗。没有可获得的信息表明杆状病毒-昆虫细胞来源的G蛋白在其效能上与完整病毒粒子疫苗是否是相当的。在本发明中，已经将重组毕赤酵母来源的G蛋白疫苗的效能与灭活的金迪普拉病毒完整病毒粒子疫苗比较，以研究它们是否引发可比较水平的中和抗体并且提供针对病毒攻击的保护效能。这个信息非常重要，因为从在表达其的宿主细胞纯化的任何重组抗原应该被假定可与完整病毒粒子疫苗同样有效地引发中和抗体的构象。为了比较这些结果，得到灭活的完整病毒粒子疫苗所采用的方法也很重要，例如，灭活剂的选择、将病毒暴露于灭活剂的时间和温度、和对完整病毒的完整性不是有害的病毒纯化的方法。在本发明中描述了金迪普拉病毒灭活的不同的方法。使用金迪普拉病毒的灭活的完整病毒粒子作为一种非常有前景的候选疫苗是本发明的一个方面。