[发明专利]扩增造血干细胞

说明书

相关申请

本申请要求2010年11月24日提交的美国临时申请61/417，193的优先权。将该优先权申请全部内容并入本文作为参考。

发明背景

血细胞生成(hematopiesis)包括造血干细胞(HSC)的增殖和它们向祖细胞(例如红系祖细胞(erythroprogenitor cell))的分化。HSC产生血液和免疫系统的所有谱系的成熟细胞。

在数十年间，多个谱系特异性转录因子，如GATA-1和EKLF已经显示在血细胞生成/红细胞生成中具有重要作用。然而，尚未完全了解允许扩展血细胞生成和红细胞生成的细胞-内在的因子。已经显示一些细胞-内在的因子(如WNT3a，β-联蛋白和HOXB4)的过表达导致HSC在小鼠中的显著扩增。然而，它们对人HSC的扩增的效果有限。

离体(ex vivo)扩增人HSC的困难成为基于人HSC的治疗应用，例如造血系统的重建中的主要挑战。存在开发有效扩增人HSC的方法的需要。

发明概述

本发明基于VentX的下调导致人HSC的离体扩增的出人意料的结果，所述人HSC是CD34+，在体外(in vitro)和体内(in vivo)都是如此。

本发明的一个方面涉及扩增HSC的方法。所述方法包括两个步骤：(1)从受试者(例如人和非人哺乳动物)分离HSC，和(2)使HSC与抑制VentX多肽的表达或活性的试剂接触，由此增加HSC的扩增。分离步骤可以通过从所述受试者获得包含HSC的生物样品(例如，骨髓、外周血和脐带血)并且从所述生物样品中收集HSC来进行。

在一个实例中，试剂是免疫抑制剂，例如依木兰(Imuran)、甲氨蝶呤(methotrexate)、泼尼松(prednisone)或骁悉(Cellcept)。所述试剂也可以是干扰RNA(iRNA)试剂、反义寡核苷酸、核酶或抗体。

所述iRNA试剂具有第一链，所述第一链具有与编码VentX蛋白的基因的区域同源的第一核苷酸序列。所述iRNA试剂靶向从该基因转录的mRNA，包括其5’非翻译区。

第一核苷酸序列可以是RNA形式，例如

UUCAGAAUCGCCGCAUGAAACACAAACGG(SEQ ID NO：5)，

UCUACUCAACGUCUUCUGGCCUUGCCAAU(SEQ ID NO：6)，

CAAAUCUGCCUGCGCCGGAGAGGACCAUG(SEQ ID NO：7)，

GGUUGAGUAAGGAGCCAAAUACCUUGCGG(SEQ ID NO：8)，

CGGGUUGAGUAAGGAGCCAAAUA(SEQ ID NO：9)，

CCGCAUGAAACACAAACGGCAAA(SEQ ID NO：10)，

CCCCAGCUUUCUACUCAACGUCU(SEQ ID NO：11)，

GGGUUGAGUAAGGAGCCAA(SEQ ID NO：29)，

GGUUGAGUAAGGAGCCAAA(SEQ ID NO：30)，

GCUCUCAGAGGUCCAGAUA(SEQ ID NO：31)，

GGUUUCAGAAUCGCCGCAU(SEQ ID NO：32)，

UCAGAAUCGCCGCAUGAAA(SEQ ID NO：33)，

UCGCCGCAUGAAACACAAA(SEQ ID NO：34)，

GCCGCAUGAAACACAAACG(SEQ ID NO：35)，

GCAUGAAACACAAACGGCA(SEQ ID NO：36)，

GCUUUCUACUCAACGUCUU(SEQ ID NO：37)，

UCUCUGCCAAGUGGCACAA(SEQ ID NO：38)，

GGACUCAGUUGUUCUGUUU(SEQ ID NO：39)，

CCCGGCCCUGAGAAUAUAU(SEQ ID NO：40)，

CCGGCCCUGAGAAUAUAUU(SEQ ID NO：41)，

GGUCAGUGAACAGAGUCAA(SEQ ID NO：42)，

GCAGAAGUGGGCUUGUCAU(SEQ ID NO：43)，

GCAGGUGUGUUUAUAGCGU(SEQ ID NO：44)，