[发明专利]进料混合装置及其用途

说明书

在本文中报道了一种进料混合装置，其允许将具有非生理性pH值的两种或两种以上进料溶液同时进料给培养基，借此在加入培养基之前，在进料混合装置内将总进料溶液的pH值调整至例如，生理性pH值。

发明背景

为了在哺乳动物细胞的培养中增加产物产量或者培养时间，将进料溶液加入到培养基，以使必需的培养基组分的浓度维持在临界水平或者临界水平之上。

具有与培养基不同物理性质的水溶液的进料将影响培养基的物理参数，如渗透性或pH值。由于不同组分差的溶解度或者所需的稳定性，所以有时不得不将进料溶液的pH值改变成非生理性值。

Luan，Y.T.，等人报道了在培养中延长杂交瘤的寿命，并提高单克隆抗体的产量的策略（Biotechnol.Lett.9（1987）691-696）。Dempsey，J.，等人报道了用于表达人抗体和谷氨酰胺合成酶的NS0细胞系的改进的发酵工艺（Biotechnol.Prog.19（2003）175-178）。Bibila，T.A.，等人报道了使用培养基浓缩物进行的单克隆抗体方法的研发（Biotechnol.Prog.10（1994）87-96）。

在WO2008/013809中报道了细胞培养方法。在US2006/0003448中报道了干粉细胞和细胞培养试剂以及其产生的方法。在US5,081,036中报道了用于细胞培养的方法和设备。在US5,681,748中报道了培养基浓缩技术。在US6,924,124中报道了用于细胞培养的进料策略。

在WO2009/132616中报道了供应系统。在WO2010/045168中报道了使用商业规模的生物反应器生产乙醇和糖的方法和设备。在US2003/0092652中报道了用于核酸分子的保护性单瓶制剂（protected one-vial formulation）、通过线内混合制备用于核酸分子的保护性单瓶制剂的方法，以及相关的产品和方法。

发明概述

使用如在本文中所报道的进料混合装置，可以例如在具有使组分具有好溶解度和/或好稳定性的pH值的溶液中提供进料组分，从而pH值可以不同于培养基的pH值，即溶液具有小于pH6.5或者大于pH7.5的彼此相互独立的pH值。与在例如进料溶液的pH值被限制在培养基的pH值附近很小范围的培养相比较，这允许更灵活地进行培养。

如在本文中所报道的一方面是用于将各自具有非生理性pH值的至少两种溶液加入细胞培养容器的装置，所述装置包含在将溶液加入到细胞培养容器之前，用于混合溶液的小室。

在一个实施方案中，用于混合溶液的小室的体积与培养容器中培养基的体积的比例为0.8ml/l至1.2ml/l。在一个实施方案中，该比例为0.9ml/l至1.1ml/l。在一个实施方案中，该比例为约1ml/l。在一个实施方案中，该比例为0.95ml/l。在一个实施方案中，培养基的体积是在起始培养时，培养容器中液体的体积。

在一个实施方案中，各自具有非生理性pH值的至少两种溶液，至少一种是酸性溶液并且至少一种是碱性溶液。在一个实施方案中，各自具有非生理性pH值的至少两种溶液具有相互独立的小于pH6.5或者大于pH7.5的pH值。在一个实施方案中，各自具有非生理性pH的至少两种溶液具有相互独立的pH0至pH6.49或者pH7.51至pH14的pH值。

在一个实施方案中，酸性和碱性溶液的pH值与培养基的pH值相差至少0.5个pH单位。在一个实施方案中，酸性溶液具有pH6.5或更低的pH值。在一个实施方案中，酸性溶液具有pH4.0或更低的pH值。在一个实施方案中，碱性溶液具有pH8.0或更高的pH值。在一个实施方案中，碱性溶液具有10.0或更高的pH值。

在一个实施方案中，将该装置用于加入具有非生理性pH值的两种至四种单独的溶液，其中任选地至少一种是酸性溶液，并且至少一种是碱性溶液。

在一个实施方案中，每种溶液都是包含选自氨基酸、糖、维生素、微量元素、乳酸和生长因子的至少一种化合物的进料溶液。

在一个实施方案中，用于混合溶液的小室与培养容器是分离的，并且所述小室包含进入到培养容器的内部的出口。在一个实施方案中，小室在培养容器的外部或者在培养容器的内部。

在一个实施方案中，小室具有0.1ml至50,000ml的体积。在一个实施方案中，小室具有0.25ml至30,000ml的体积。在一个实施方案中，小室具有0.5ml至1,000ml的体积。