[发明专利]生物体试样制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种生物体试样制备方法。

背景技术

以往，已知一种通过照射高输出的激光来从生物体组织的组织切片的确定区域提取碎片的技术(例如，参照非专利文献1)。提取出的碎片使用于存在于病变部位等确定区域内的核酸、蛋白质等生物体分子的分析。此时，使用色素对组织切片进行染色而能够用显微镜来识别组织形态，由此正确地判断要提取的碎片的位置。

非专利文献1：Leica MICROSYSTEMS、“レーザマイクロダイセクションLeica LMD7000”、[online]、[平成22年10月5日検索]、インターネット<URL：http://www.leica-microsyste ms.com/jp/products/light-microscopes/life-science-research/lase r-microdissection/details/product/leica-lmd7000/>

发明内容

发明要解决的问题

然而，为了用组织切片的染色图像来详细地识别组织形态，需要使组织切片薄到从数μm到10μm左右。因而，存在以下问题：提取出的一个碎片所包含的生物体分子量少，为了在分析中收集足够量的生物体分子，必须使用很多组织切片来多次反复提取碎片。另一方面，通过增加组织切片的厚度能够增加从一个碎片得到的生物体分子的量。但是，在该情况下细胞、组织在厚度方向上重叠，因此组织切片整体被大致均匀地染色。因而，存在变得无法根据染色图像正确地判断要提取的碎片的位置这种问题。

本发明是鉴于上述情形而完成的，目的在于提供一种通过一次操作能够从组织切片内的期望区域提取足够量的生物体分子的生物体试样制备方法。

用于解决问题的方案

为了达到上述目的，本发明提供以下方法。

本发明提供一种生物体试样制备方法，包括以下步骤：切薄片步骤，通过一个切断面将生物体组织切薄片；染色步骤，对通过该切薄片步骤切薄片而得到的两个组织切片内的一个组织切片进行染色；染色图像摄像步骤，获取在该染色步骤中被染色的组织切片的染色图像；无染色图像摄像步骤，针对通过上述切薄片步骤切薄片而得到的两个上述组织切片内的另一个组织切片获取定义有用于将该组织切片分割成多个碎片的分割线的无染色图像；以及对应步骤，使在该无染色图像摄像步骤中获取到的无染色图像与在上述染色图像摄像步骤中获取到的染色图像对应。

根据本发明，沿着在无染色图像摄像步骤中获取到的无染色图像内的分割线来分割在切薄片步骤中切薄片而得到的另一个组织切片，由此能够制备组织切片的碎片。

在该情况下，在染色步骤中进行染色、在染色图像摄像步骤中拍摄到的染色图像内的一个切片的组织形态与无染色图像内的另一组织切片的组织形态相同。因而，通过参照在对应步骤中与无染色图像内的各碎片对应的染色图像内的一个组织切片的部位，操作者能够获知各碎片所具有的组织形态，能够制备或者分析组织切片的期望区域的碎片。另外，要提取碎片的组织切片不需要薄到适合于染色的薄度。因而，以在一个碎片中大量包含生物体分子的方式将另一个组织切片切成比一个组织切片厚的薄片，通过一次操作能够提取足够量的生物体分子。

在上述发明中，也可以是，在上述无染色图像摄像步骤中，在能够沿着上述分割线进行分割的基板上搭载上述另一个组织切片来进行拍摄。

通过设为这种结构，仅拍摄搭载于基板上的组织切片就能够获取对组织切片定义有分割线的无染色图像。

在上述发明中，也可以是，上述对应步骤包括以下步骤：轮廓抽取步骤，从上述无染色图像和上述染色图像中分别抽取两个上述组织切片的轮廓；以及叠加步骤，以使通过该轮廓抽取步骤抽取出的两个上述轮廓一致的方式将上述无染色图像与上述染色图像叠加。

在上述发明中，也可以是，上述对应步骤包括以下步骤：特征点抽取步骤，从上述无染色图像和上述染色图像中抽取多个相同的特征点；以及叠加步骤，以使通过该特征点抽取步骤抽取出的特征点的位置一致的方式将上述无染色图像与上述染色图像叠加。

通过设为这种结构，能够使各个图像内的组织切片容易且更正确地对应。

在上述发明中，也可以构成为还包括以下步骤：指定步骤，在上述对应步骤之后指定要从上述组织切片提取的上述碎片；以及回收步骤，沿着上述分割线将上述组织切片分割成多个碎片，回收在上述指定步骤中指定的上述碎片。