[发明专利]新型酿酒酵母菌株

权利要求书

1.一种用于产生酿酒酵母菌株的方法，这种酿酒酵母菌株具有被引入的编码木糖还原酶、木糖醇脱氢酶以及木酮糖激酶的基因并且具有改进的乙醇产量、改进的木糖转化率以及降低的木糖醇产量，这种方法包括以下步骤：

a)以连续模式，用一种基本上仅包含木糖作为碳源的培养基，在25°C-38°C、优选地30°C-35°C的温度以及0.01vvm-0.06vvm的气流下，培养具有被引入的编码木糖还原酶、木糖醇脱氢酶以及木酮糖激酶的基因的酿酒酵母细胞，并且增加稀释率以维持恒定细胞水平，所述细胞水平通过光学密度或等效分析手段测定在1.5-3.0范围内，

b)并且添加至少一种抑制剂到这些细胞中并且逐渐增加所述抑制剂的添加。

2.根据权利要求1所述的方法，其中步骤a)的该培养基包含15g/l-25g/l木糖、优选地约20g/l木糖。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其中该方法另外包括以下步骤：

c)在培养这些细胞期间使来自步骤b)的这些细胞经受35°C-45°C的增加的温度和/或紫外光处理。

4.根据权利要求1-3中任一项所述的方法，其中该方法另外包括以下步骤：

d)从步骤b)或从步骤c)选择具有木糖转化能力以及抑制剂耐受性的细胞。

5.根据权利要求4所述的方法，其中该选择是在一个具有木糖作为基本上唯一碳源和/或所述至少抑制剂或任何其他抑制剂的琼脂板上进行。

6.根据权利要求4所述的方法，其中该选择是在一个具有任何碳源以及所述至少一种抑制剂或任何其他抑制剂的琼脂板上进行。

7.根据权利要求1-6中任一项所述的方法，其中这些细胞的培养继续进行直到与至少前一代相比在所观察的代中基本上不再观察到表型变化。

8.根据权利要求1-7中任一项所述的方法，其中该抑制剂是选自呋喃，如HMF和糠醛；有机酸，如乙酸和甲酸；以及酚系化合物。

9.根据权利要求1-8中任一项所述的方法，其中将该改进的乙醇产量、改进的木糖转化率以及降低的木糖醇产量与以CBS102679（TMB3400，Taurus01）保藏的菌株相比。

10.一种具有被引入的编码木糖还原酶、木糖醇脱氢酶以及木酮糖激酶的基因并且具有改进的乙醇产量、改进的木糖转化率以及降低的木糖醇产量的酿酒酵母菌株，该酿酒酵母菌株可以通过根据权利要求1-9中任一项所述的方法获得。

11.一种具有改进的乙醇产量、改进的木糖转化率以及降低的木糖醇产量的酿酒酵母菌株，其中所述菌株是保藏号为CBS128138的Taurus03。

12.一种具有改进的乙醇产量、改进的木糖转化率、降低的木糖醇产量以及增加的抑制剂耐受性的酿酒酵母菌株，其中所述菌株是保藏号为CBS128139的Taurus04。

13.一种具有改进的乙醇产量、改进的木糖转化率、降低的木糖醇产量以及增加的抑制剂耐受性的酿酒酵母菌株，其中所述菌株是保藏号为CBS128140的Taurus07。

14.一种根据权利要求10-13中任一项所述的菌株的用途，该菌株是用于将木质纤维原料发酵为乙醇。

15.一种根据权利要求10-13中任一项所述的菌株的用途，该菌株是用于同时糖化和发酵（SSF）工艺中。