[发明专利]包含通过疏水部分修饰的肽的基于脂质体的构建体

说明书

本发明涉及用于制备基于脂质体的构建体的经改良方法，所述构建体包含在脂质体中经重构的通过疏水性部分修饰的目标肽、尤其是目标抗原性肽，且涉及利用所述方法获得的抗原性构建体。本发明还涉及此类构建体用于治疗性及诊断性目的的用途，尤其涉及在治疗疾病及病症中的用途，所述疾病及病症由诸如阿尔兹海默氏病(Alzheimer′s Disease)的蛋白质构象病(proteopathy)引起或与其相关。

脂质体已取得长足发展，从生物物理研究的仅仅另一异物变成所选用于多种实际应用的药物载体(Torchilin，Nature Reviews，2005，4，145-160)。脂质体是主要由(磷)脂类构成的人工囊泡，且可含有在其内部水性体积内的药物或可溶性抗原或掺入双层中的两亲性抗原(例如膜蛋白质)。已将来自许多微生物及肿瘤细胞的抗原掺入此类具有详细特征且进行体内测试的脂质体中。使用含有抗原的脂质体的临床研究已显示，其是安全的且通常不会诱导严重副作用(Kersten及Crommelin，Biochimica et Biophysica Acta1995，1241，117-138)。

人们已于30多年前对使用脂质体作为呈递抗原的运载体的想法进行了测试(Allison及Gregoriadis，Nature，1974，252，252)。举例而言，已显示，掺入脂质体中的白喉类毒素的免疫原性高于其游离形式。通过脂质体呈递的抗原可诱导体液以及细胞免疫应答。迄今所研发的多数脂质体疫苗是通过在脂质体的水性腔内抗原包封来制备。另外，文献中最近报导了脂质体的应用，所述脂质体载有随机分布于其表面上的疏水性或两亲性抗原(即偶尔面向内部或外部水溶液的抗原)(Muhs等人，PNAS，2007，104，9810-9810；Nicolau等人，PNAS，2002，99，2332-2337；WO2007/068411)。Frisch等人已观察到，与经囊封(encapsulated)的肽相反，含有单磷酰脂A(MPLA)作为佐剂的囊泡的表面上表达小B细胞表位能够诱导强且有特异性的体液(产生抗体)(Frich，Eur J Immunol1991；21：185；Alving等人，Immunol Rev1995；145：5)。因此，期望非炎性应答时，则脂质体的表面上呈递的抗原可能更适于治疗性疫苗。因此，在脂质体形成后添加抗原，随后将其整合于脂质体中应当提供抗原在外部脂质体脂质层中的单一分布。实际上，已研发出后插入方法且其广泛报导于文献中，所述方法可概述为抗原与脂质体外部脂质表面上的反应物之间的偶合，或使用聚乙二醇化肽(Allen等人，Cellular& Molecular Biology Letters，2002，7，217-219；Guan等人，Bioconjugate Chem，1998，9，451-458；Moreira等人，Pharmaceutical Research，2002，19，265-269)。然而，本领域所述使用化学缀合(例如稳定的硫瞇键或生物可还原二硫连接)的后插入方法的主要限制是缺乏位置特异性，需要脂质体反应基团的插入及额外下游过程。由此产生的基于脂质体的构建体不能进行无菌过滤。此外，肽与外部脂质体层的共价缀合尚不适用于不同种类的抗原，例如疏水性肽。

一种常用方法涉及聚乙二醇化状的应用，其基于通过肽-PEG-磷脂缀合物(有时借助额外表面活性剂)形成的微团。在与预形成的脂质体孵育后，此方法在优化条件下导致肽缀合物白发转移(分子易位)至脂质体的外膜小叶中。然而，此方法易于发生囊泡去稳定(若需要额外表面活性剂)且可诱导副免疫应答(由于PEG可其有免疫原性)。

因此仍需要提供基于脂质体的构建体的方法，其中该方法允许克服现有技术的多数或全部缺点且提供经改良的抗原性构建体，其在以下方面表现理想的性质

·产率，

·囊泡稳定性，

·均质性，

·区域特异性(肽的拓扑结构、外部及内部分布)，

·过滤性，

·多数抗原在脂质体的表面上的呈递，等。

本发明通过提供如独立权利要求的特征所定义的方法及构建体来处理及解决此尚未满足的需要。优选的实施方案是从属权利要求的主体。