[发明专利]丙型肝炎病毒基因

说明书

技术领域

本发明涉及丙型肝炎病毒(以下有时称作“HCV”)基因、携带该基因的RNA复制子、感染该RNA复制子并复制HCV的细胞和HCV颗粒。

背景技术

HCV是慢性丙型肝炎的致病因子，根据WHO的统计，推测全球有1.7亿感染者。HCV是被分类为黄病毒科、黄病毒属的病毒，认为其经由血液或血液成分而感染，并在肝脏中增殖。HCV感染者在感染初期只出现比较轻微的症状，但往往会转变成慢性，经过一定期间的无症候性期后，成为慢性肝炎。而且，随着感染的长期化，症状进一步恶化成肝硬化，并往往发展为肝癌。认为95%的肝癌与肝炎病毒有关，而其中80%是由HCV感染引起的。

在慢性丙型肝炎的治疗中，广泛使用干扰素。近年来，由于干扰素剂型的改良、或干扰素与利巴韦林的联用疗法等给药方法的改善，HCV从体内被驱除，治愈的比例也逐渐增加。但是，干扰素给药的治愈率只有5成左右，认为存在多种对干扰素治疗显示出耐药性的HCV。因此，人们希望开发对干扰素耐药性的病毒具有疗效的药物。

在上述药物的开发中，药物的筛选系统是必需的。有人报道了：在试管内使来自人或猴的细胞感染HCV并增殖，但这样的增殖系统，其感染效率、增殖效率均低，无法用作药物的筛选系统。

胁田等人从重症丙型肝炎患者体内分离出基因型2a的HCV基因(专利文献1)。在试管内(体外)由该分离的JFH1株合成全长RNA、并将其导入来自人肝癌的细胞(Huh7细胞)中时，可以得到在细胞内进行自主复制的复制子RNA。而且，确认感染性颗粒被释放到导入有复制子RNA的细胞培养上清中(非专利文献1)。因此，通过将JFH1株的复制子RNA导入来自人肝癌的细胞(Huh7细胞)中，并将所得的感染性颗粒再次与来自人肝癌的细胞进行培养，可以构建再感染增殖系统。通过使用该再感染增殖系统，抗HCV的药物的筛选开始进行。

但是，JFH1株是基因型2a的HCV，是干扰素敏感性HCV。因此，不具有对干扰素显示出耐药性的HCV基因区，也无法特定作用于规定干扰素耐药性的区域的宿主侧的因子。因此，有可能无法筛选对干扰素耐药性HCV具有效果的药物。

另外，Lemon等人报道了：将基因型1a的H77株的复制子RNA导入来自人肝癌的细胞(Huh7细胞)中得到的感染增殖系统(非专利文献2)。但是，虽然使来自人肝癌的细胞再次感染由导入了该复制子RNA的细胞的培养上清得到的病毒颗粒，但与上述的JFH1株的感染性颗粒相比，感染效价低400倍，因此认为H77株的复制子RNA释放出丧失了感染性的病毒颗粒。因此，认为可以在试管内进行复制的H77株的复制子RNA丧失了产生感染性颗粒的功能，未保留原有的HCV的增殖功能。因此，使用了该H77株的复制子RNA的感染增殖系统的筛选系统有可能无法筛选对在生物体内具有增殖功能的HCV有效的药物。

如上所述，虽然胁田和Lemon报道的复制子RNA可以筛选一部分药物，但这些复制子RNA存在上述问题，认为它们无法筛选可广泛用于HCV治疗的药物。

另外，为了得到可以广泛用于HCV治疗的药物，本发明人还开发了pTPF1/4B作为HCV的有效率的增殖系统、即具有基因型1b型的基因、呈干扰素耐药性、且可以产生感染性颗粒的试管内增殖系统(专利文献2)。但是，该培养系统在实用性上存在以下问题：在来自人肝癌的细胞即Huh7细胞中，细胞内的自主增殖、RNA的自身复制、培养上清中的病毒颗粒的分泌效率均差。另外，非专利文献3中报道了：在NS2区的C末端侧存在与感染性有关的重要区域。

现有技术文献

专利文献

专利文献1：日本特开2002-171978号公报；

专利文献2：WO 2008/136470；

非专利文献1：Nature Medicine，2005年，第11卷，第791-796页；

非专利文献2：Proceeding of the National Academy of Science of the United State of America，2006年，第103卷，第2310-2315页；

非专利文献3：Journal of Virology，2009年，第83卷，第12702-12713页。

发明内容

发明所要解决的课题