[发明专利]基于长线形病毒的核酸分子及其用途

说明书

交叉参考相关申请

本申请要求2010年10月8日提交的美国临时申请号61/391,333的权益，为了所有目的将其内容通过引用整体并入本文。

发明领域

本发明总地来说涉及用于在植物细胞中产生靶多肽的新型核酸分子。更具体地，所述核酸分子包括来源于长线形病毒科(Closteroviridae)病毒的微型复制子(minireplicon)及编码靶多肽的多核苷酸。

发明背景

使用植物病毒载体产生重组蛋白(包括单克隆抗体(mAb)、疫苗抗原、酶、双效疫苗(dual vaccine)、融合分子及病毒样颗粒(VLP))是对常规的基于哺乳动物细胞的表达系统的有吸引力的替代方式。由于病毒复制速度很快，因此植物病毒载体具有快速产生大量外源蛋白的潜力。

基于烟草花叶病毒(TMV)的载体是最广泛地用于瞬时表达植物产生的亚基疫苗和治疗性蛋白质的载体(Streatfield；Yusibov等人；Gleba等人；Rybicki)。然而，使用TMV载体表达高分子量蛋白质或共表达多个多肽链或蛋白质是存在挑战的。仍然需要用于在植物中产生单个大的靶蛋白以及同时产生多个靶蛋白的改进的植物病毒载体。

发明概述

本发明的公开的主题涉及用于在植物细胞中产生靶多肽的新型核酸分子。

根据本发明的一个方面，提供了用于在植物细胞中产生一种或多种靶多肽的分离的核酸分子。核酸分子包括来源于长线形病毒科病毒的微型复制子和一种或多种异源多核苷酸。核酸分子能够在植物细胞中复制。一种或多种异源多核苷酸编码一种或多种靶多肽。核酸分子还可包括编码一种或多种来源于长线形病毒科病毒的移动蛋白(movement proteins)的多核苷酸。长线形病毒科病毒可以是甜菜黄化病毒(Beet yellows virus)。

植物细胞可存在于植物、植物部分或细胞培养基中。植物可以是完整的正在生长的植物。植物部分可选自叶、茎、根、花组织、种子和叶柄。

在一个实施方案中，一种或多种靶多肽包含蛋白质的一个或多个亚基，并且能够在植物细胞中形成所述蛋白质。蛋白质可以是酶。

在另一个实施方案中，一种或多种靶多肽包括第一多肽和第二多肽，并且第一多肽能够在植物细胞中修饰第二多肽。

在另一个实施方案中，一种或多种靶多肽包括第一多肽和第二多肽，并且第一多肽能够影响第二多肽在植物细胞中的表达。第一多肽可以是沉默抑制子(silencing suppressor)。

在其它实施方案中，一种或多种靶多肽包括第一多肽和第二多肽，并且第一多肽能够增加第二多肽在植物细胞中的产生。

在其它实施方案中，一种或多种靶多肽包括抗体的重链和轻链，并且能够在植物细胞中形成所述抗体。

一种或多种靶多肽可包括免疫原性多肽。一种或多种靶多肽包括至少100kD的多肽。

对于本发明的每一种核酸分子，提供了包含所述核酸分子的载体。

根据本发明的另一个方面，提供了用于在植物细胞中产生一种或多种靶多肽的方法。方法包括(a)将核酸分子引入植物细胞；和(b)在允许一种或多种靶多肽在植物细胞中产生的条件下维持植物细胞。核酸分子包括来源于长线形病毒科病毒的微小扩增子和一种或多种异源多核苷酸。核酸分子能够在植物细胞中复制。一种或多种异源多核苷酸编码一种或多种靶多肽。一种或多种靶多肽包括至少100kD的多肽。所述方法还可包括从植物细胞纯化一种或多种靶多肽的至少一种。核酸分子还可包括编码一种或多种来源于长线形病毒科病毒的移动蛋白的多核苷酸。长线形病毒科病毒可以是甜菜黄化病毒。

在本发明的产生方法中，植物细胞可存在于植物、植物部分或细胞培养基中。植物可以是完整的正在生长的植物。植物部分可选自叶、茎、根、叶组织、种子和叶柄。

提供了包含至少一种通过本发明的方法产生的一种或多种靶多肽的组合物。还提供了治疗需要至少一种由此产生的一种或多种靶多肽的受试者的方法。治疗方法包括给受试者施用有效量的包含一种或多种靶多肽的至少一种的药物组合物。