[发明专利]表面活性肽及其盐的制造方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种具有表面活性能的表面活性肽或其盐的制造方法。

背景技术

已有报告指出，表面活性肽除了具有高表面活性能以外，还具有抗菌活性、溶血性、蛋白变性抑制等多种多样的功能。这样的作为功能性材料而有用的表面活性肽，已知可由芽孢杆菌(bacillus)属微生物生产，并可通过对该芽孢杆菌属微生物进行培养而实现工业上对表面活性肽的批量生产(专利文献1等)。作为由含有该表面活性肽的培养液制造表面活性肽及其盐的方法，例如可以举出如下方法：

1)使培养液成为酸性，加入二氯甲烷和甲醇、并使(二氯甲烷:甲醇)＝2:1(体积比)，从而将表面活性肽萃取至有机层，进行浓缩，然后利用薄层色谱法(TLC)进行纯化的方法(专利文献2)；

2)在培养液(pH6)中加入辛烷后，对有机层进行浓缩并通过超滤来进行纯化的方法(非专利文献1)；

3)通过离心分离从培养液中分离出菌体等不溶物后，使滤液成为酸性而取得沉淀物，向其中加入二氯甲烷并对表面活性肽进行固液萃取后，对有机层进行浓缩。接着，在加入碱水后废弃有机层，使水层成为酸性而得到沉淀物，再对该沉淀物进行冷冻干燥的方法(专利文献3)。

现有技术文献

专利文献

专利文献1：日本特开2002-176993号公报

专利文献2：韩国公开专利第2005-0007670号公报

专利文献3：中国专利申请公开第101041846号说明书

非专利文献

非专利文献1：Biochemical Engineering Journal、2008、42、248-253

发明内容

发明要解决的问题

但是，这些从培养液中获得表面活性肽及其盐的制造方法由于以下原因而不能认为适于工业上实施。例如，1)的方法虽然可以直接从培养液中萃取表面活性肽，但由于使用了环境负担高的二氯甲烷作为萃取溶剂，而且要利用薄层色谱法进行纯化，因此，从操作方面上，不能认为适于工业上实施。就方法2)而言，相对于表面活性肽1重量份，需要2500重量份的溶剂(生产1kg表面活性肽时，溶剂为2.5吨)，从环境及成本方面上，不能认为适于工业上实施。就方法3)而言，在菌体分离后，要使滤液成为酸性来收集沉淀物，并且要用二氯甲烷从沉淀物中进行萃取等，操作繁琐，除此之外，还要使用环境负担大的溶剂，因此，不能认为适于工业上实施。

鉴于上述情况，本申请的课题在于提供一种不需要繁琐的操作、且经济方面有利的适于工业上实施的表面活性肽及其盐的制造方法。例如，本申请的课题在于提供一种不需要分离不溶物(菌体)而直接从培养液中萃取表面活性肽的方法。

除了上述课题以外、或者代替上述课题，本申请的目的还在于提供一种即使使用低环境负担型的溶剂也可以高效地从培养液中萃取表面活性肽的表面活性肽及其盐的制造方法。

解决问题的方法

本发明人等针对适于工业上实施的表面活性肽及其盐的制造方法进行了深入研究，结果发现，通过使用支链烷基醇作为萃取溶剂，即使不从培养液中除去不溶物也可以容易地对表面活性肽进行萃取、纯化。

即，本发明涉及一种表面活性肽或其盐的制造方法，该方法包括：向含有表面活性肽或其盐的培养液中或从培养液中除去了不溶物的溶液中，加入含有支链烷基醇的有机溶剂来萃取表面活性肽或其盐。其中，所述表面活性肽或其盐以下式表示。

[化学式1]

(式中，*表示光学活性位点。X表示选自亮氨酸、异亮氨酸、缬氨酸中的氨基酸，R表示碳原子数9～13的烷基及支链烷基。M表示碱金属、碱土金属、任选被取代的胺等。)

萃取时水层的pH优选为酸性(特别是1～5)，例如，优选支链醇的碳原子数为3～10，其在有机溶剂中的含量为30重量%以上。所述有机溶剂可以含有辅助溶剂，优选相对于培养液1重量份，支链烷基醇和辅助溶剂的总量为0.6～1.5重量份。

对于萃取后的液体，可以在使其与碱水溶液混合后，分离有机层而得到水溶液，接着，将该水溶液和无机酸混合，由此使表面活性肽以固体形式从该混合液中析出。另外，也可以在萃取后的液体中混合碱，从而从该混合液中得到固体形式的表面活性肽盐。还可以将通过以上的制造方法得到的表面活性肽和碱混合来得到表面活性肽盐或其溶液。

发明的效果