[发明专利]DNA表达构建体的用途

说明书

发明领域

本发明涉及包含哑铃形环状链的脱氧核糖核酸的DNA表达构建体的用途。

发明背景

几种DNA构建体或载体(其适合于蛋白的表达，其由这样的DNA构建体内的序列编码)是本领域的状态中已知的。根据表达构建体应当引入进其中的生物体或细胞类型，它们被指定为真核或原核表达构建体。术语“质粒”通常与包含共价闭合环状DNA双链的环状表达构建体相关。质粒通常含有除了应当表达的序列之外的进一步的序列，像用于它们的特异性选择的标记基因，和在一些情况下用于它们在靶细胞中的附加型复制的序列。

EP 0 941 318中描述了结构不同的表达构建体。该文献公开了在两端具有部分单链环的哑铃形线性共价闭合DNA构建体。根据用于将DNA构建体引入进细胞中的方法，这样的构建体引起转染后的显著增加水平的蛋白表达。

EP 0 941 318进一步公开，经由弹道转移(ballistic transfer)应用这样的哑铃形DNA构建体就蛋白表达而言是有利的。尽管表达水平增加，借助吸附、共价或离子结合至用于弹道转移的微射弹(micro projectiles)而连接DNA是费力的。

适合用于DNA转移进细胞的喷射注射器是本领域的状态中已知的，例如用于疫苗的应用中。这样的喷射注射器通常是具有注射器的医疗装置，其使用高压窄喷射用于液体注射。与通常使用的穿透表皮的皮下针的差别在于，喷射注射器降低了与相应注射相关的疼痛。通常，通过压缩的空气或气体，通过来自大圆筒或来自内置的气筒或小圆筒的压力软管驱动喷射注射器。基本上，使用喷射注射器作为针注射器的替代方案。

发明概述

本发明的一个目的是提供用于转移进细胞的哑铃形DNA表达构建体的替代用途。

本发明提供了哑铃形线性共价闭合DNA构建体通过喷射注射被施用而用于治疗癌症的用途，所述DNA构建体具有双链茎和位于所述茎两端的单链环，其中环状DNA链的互补脱氧核糖核酸的茎包含启动子序列、编码序列和终止信号。

希望启动子序列在真核细胞和人类中是可操作的。使所用启动子适应于组织或各自组织的来源以优化分别转移进细胞或细胞核后的表达率可能是有利的。

可以使用DNA构建体以编码免疫调节剂和/或细胞表面标记。术语“免疫调节剂”包括免疫系统的刺激剂和抑制剂。在增强或抑制免疫应答的含义中，术语“免疫系统的调节”和“免疫系统的活化”是同义使用的。

免疫调节剂应当选自抗体、激素、细胞因子或其他生物活性物质。术语“生物活性物质”包含所有物质，所述物质导致它们应用或转移进细胞或组织后的效应，其中各自物质是否是合成产生的或是生物来源的无关，其包括基于遗传的制备方法。

本发明的用途包含编码免疫系统的传递物或信使(像细胞因子，其选自TNF-α、白介素-7、粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子、CD40L/CD154和B7.1/CD80)的DNA构建体。除了所述传递物，介导免疫学信号的任何其他分子在本发明的范围内。

本发明的用途也涵盖与化疗剂同时或相继施用的DNA构建体，其中同时施用包括如下选项：由于相应的制剂或偶联至足够的化合物而导致的化合物以时间延迟释放。

本发明的用途是指选自如下的化疗剂：抗体、烷化剂、铂类似物、嵌入剂、抗生素、有丝分裂抑制剂、紫杉烷类、拓扑异构酶抑制剂、抗代谢物和/或L-天冬酰胺酶、羟基脲、米托坦(mitotanes)和/或鹅膏蕈碱。

有丝分裂抑制剂长春地辛显示出与编码TNF-α的哑铃形DNA表达构建体组合的非常好的结果。

进一步希望提供DNA构建体作为药学上适用的组合物，特别是疫苗。

本发明的用途进一步希望通过喷射注射共同施用非编码的免疫调节性DNA序列。再次，这种额外的化合物可以同时或相继施用，甚至在同时施用的情况下，可以希望时间延迟的释放。

希望非编码DNA序列的DNA序列包含至少一个序列基序N¹N²CGN³N⁴，其中N¹N²是取自GT、GG、GA、AT或AA的元件，N³N⁴是取自CT或TT的元件，C是脱氧胞苷(desoxycytosine)，G脱氧鸟苷(desoxyguanosine)，A是脱氧腺苷(desoxyadenosine)和T是脱氧胸苷(desoxythymidinethe)。

在非编码是开链寡脱氧核苷酸的情况下，用于保护末端免于核酸酶的合适的方式在本发明的范围内。