[发明专利]醋酸格拉默分子量标记

说明书

引言

本发明的方面涉及不具有预定氨基酸序列的多肽，其用作醋酸格拉默的分子量标记，并且用于精确测定醋酸格拉默的平均分子量。

醋酸格拉默(以前称为共聚物-1)化学上称为L-谷氨酸与L-丙氨酸、L-赖氨酸和L-酪氨酸的聚合物的醋酸盐。其具有式(I)的结构式。

(Glu,Ala,Lys,Tyr)_x.XCH₃COOH

(C₅H₉NO₄.C₃H₇NO₂.C₆H₁₄N₂O₂.C₉H₁₁NO₃)_x.XC₂H₄O₂

式(I)

醋酸格拉默是多肽的合成混合物的乙酸盐，所述多肽的每一种基本由四种天然氨基酸组成：平均摩尔份数分别为0.141、0.427、0.095和0.338的L-谷氨酸、L-丙氨酸、L-酪氨酸和L-赖氨酸。醋酸格拉默的平均分子量为5,000-9,000道尔顿。醋酸格拉默在美国以(Teva Pharmaceutical Industries Ltd.的注册商标)销售。指出醋酸格拉默用于降低患有复发-缓解型多发性硬化症(RRMS)的患者的复发频率。

第6,514,938号美国专利公开了七种具有在该专利中鉴定的氨基酸序列的多肽。第7,074,580号美国专利公开了用于获得含有多肽混合物的药品的方法。每种多肽基本由丙氨酸、谷氨酸、酪氨酸和赖氨酸组成。混合物具有4000道尔顿至13,000道尔顿的平均分子量，并且在该混合物中，丙氨酸的摩尔份数为0.427，谷氨酸的摩尔份数为0.141，赖氨酸的摩尔份数为0.337，并且酪氨酸的摩尔份数为0.093。该专利教导了测定某一批次的多肽水性混合物的分子量分布，所述多肽的每一种基本由丙氨酸、谷氨酸、酪氨酸和赖氨酸组成。分子量分布测定使用凝胶渗透色谱柱以测定混合物是否具有用于包含在药品中的4000道尔顿至13,000道尔顿的平均分子量。测定方法包括使用凝胶渗透色谱柱通过使多种分子量标记在柱上进行层析来建立在柱上的保留时间与分子量之间的关系，从而校准所获得的分子量，其中所述分子量标记的每一种为基本由丙氨酸、谷氨酸、酪氨酸和赖氨酸组成的多肽。

第7,163,802号美国专利公开了用于获得含多肽混合物的药品的方法，所述多肽的每一种基本由丙氨酸、谷氨酸、酪氨酸和赖氨酸组成。多肽混合物具有2000道尔顿至40,000道尔顿的平均分子量，并且在该混合物中，丙氨酸的摩尔份数为0.38至0.5，谷氨酸的摩尔份数为0.13至0.15，酪氨酸的摩尔份数为0.08至0.10，并且赖氨酸的摩尔份数为0.3至0.4。在所述方法中，使用凝胶渗透色谱柱检测某一批次的多肽混合物(所述多肽的每一种基本由丙氨酸、谷氨酸、酪氨酸和赖氨酸组成)以测定混合物是否具有用于包含在药品中的2000道尔顿至40,000道尔顿的平均分子量。检测方法包括通过使多种分子量标记(所述分子量标记各自为基本由丙氨酸、谷氨酸、酪氨酸和赖氨酸组成并且具有预定氨基酸序列的多肽)在柱上进行层析来建立在柱上的保留时间与分子量之间的关系，从而校准凝胶渗透色谱柱，所述关系用于测定多肽混合物的平均分子量。

仍亟需提供用作用于测定醋酸格拉默多肽组合物的峰值平均分子量(peak average molecular weight)的标准的醋酸格拉默分子量标记。

发明概述

本发明提供了不具有预定氨基酸序列的多肽，其用作醋酸格拉默的分子量标记，所述分子量标记用作用于测定醋酸格拉默多肽的峰值平均分子量的标准。

附图简述

图1为使用基于保留时间(RT)的算法，本发明的分子量标记的RT对那些标记的对数分子量(log molecular weight)的图。

图2是根据实施例1制备的分子量标记1的MALDI谱的图示。

图3是根据实施例1制备的分子量标记2的MALDI谱的图示。

图4是根据实施例1制备的分子量标记3的MALDI谱的图示。

图5是根据实施例1制备的分子量标记4的MALDI谱的图示。

图6是的圆二色谱的图示。

图7是根据实施例1制备的分子量标记2的圆二色谱的图示。