[发明专利]疫苗制剂的效价测试

说明书

发明领域

本发明涉及测定混合物中第一抗原的抗原含量的特定方法，该混合物包含两种或更多种抗原。本发明还涉及针对联合疫苗中抗原的效价测试(potency test)。

发明背景

含有从不同病原生物衍生的保护性抗原的联合的疫苗对于疫苗接受者和生产者都具有多重明显的益处。尤其是联合或者多价疫苗，通过减少所需的注射次数和可能地护理次数，提供增加的施用容易性和对病人的更大舒适性及便利性。由于节省了组合散装材料(bulk material)的加工、容器、包装、分配以及注射设备，它们对于制造和施用也是更加经济的。

在人类健康领域，联合疫苗常被用于做婴儿免疫的情形。联合疫苗如带有或不带有灭活脊髓灰质炎的DTP(白喉，破伤风和百日咳)、以及MMR(麻疹，流行性腮腺炎和风疹)已经应用多年，并且近些年新的抗原已加入该联合中。

在动物健康领域，联合疫苗也被普遍应用。尤其是家禽、猪、反刍动物和宠物的疫苗往往是基于多种抗原的联合。这些疫苗的例子是针对对犬的犬瘟热、肝炎、II型副流感、细小病毒、钩端螺旋体和狂犬病毒，对家畜的轮状病毒、冠状病毒和大肠杆菌，对家禽的新城疫病毒、传染性支气管炎、传染性法氏囊病、肿头综合征和产蛋下降综合征的联合疫苗。

一批疫苗只有在发出许可证或上市授权后才可准予销售。此外，该获得授权的疫苗批次的每个后续批次必须遵守所涉及的一州或多州的规定正式准许。这样的准许可在规定的批次测试令人满意地完成后基于制造商的授权而允许。因此，为了保证每一批次及各个批次的疫苗会具有其意图的效果，必须执行质量恒定的制造过程，并且效价测试的应用是该过程的重要部分。

目前，不同的测试方法被用于测定疫苗效价，如生理化学性质、抗原性、免疫原性、感染性以及抗感染或疾病的保护性的测定。它们的应用取决于疫苗抗原的性质和测试的目的。在活疫苗中，效价可以基于疫苗中存在的生物数目(滴度)。在灭活疫苗的情况下，通常通过测定靶动物物种或者其他物种如小鼠或大鼠中的免疫反应来测定效价。可选地，灭活疫苗的效价可以基于其抗原性，通过测定存在的抗原的数量(抗原量)，应用使用特异性抗体的免疫测定，如ELISA(酶联免疫吸附测定)进行。

虽然，对联合疫苗中个别抗原组分的药典需求提供了起点来建立相关及有效的效价测试，但是在更复杂的联合疫苗中各种组分间相互作用导致的问题是公知的(Vidor，J.Comp.Path.137，62-66，2007；Sesardic et al.，Biologicals 27，177-181，1999)。每个联合疫苗由活性组分赋形剂和残余物质的独特聚集体组成。这些物质中的任何都可干扰特定活性组分效价的精确测定。对于抗原的抗原性或免疫原性的干扰可能由存在的其它抗原的性质、其质量、数量或比例、佐剂、防腐剂、稳定剂、pH值、疫苗的等渗性等引起。

本发明人现在已经鉴定了在分别混合包含抗原和其他组分的组合物之后，联合疫苗中特定抗原和其他组分间意想不到的相互作用。

发明内容

令人惊讶地，发现在含有第一抗原的组合物和含有第二抗原的组合物的混合物中，第一抗原的抗原性受到结合该第一抗原从而形成抗原-抗体复合物的抗体的存在的影响，并且这些抗体可以来自含有第二抗原的组合物。实施例1和2显示下列问题：在含有不同抗原的组合物的混合物中，抗原可被无效地检测，以及在这种混合物中可形成抗原-抗体复合物，其中抗体来自与含待测抗原的组合物不同的组合物。此外，发现抗原-抗体复合物的解离导致第一抗原的抗原性恢复。这些干扰抗体的存在可由在衍生自动物的血清的存在下体外培养特定微生物(第二抗原)的必要性以及从其收获血清的这些动物被诱发针对第一抗原的抗体的微生物感染来解释。混合物中这些抗体对第一抗原的抗原性的干扰影响免疫测定中第一抗原的定量，例如效价测试用于准许疫苗批次进行销售。

简言之，本发明涉及测定至少包含第一抗原的组合物和包含第二抗原的组合物的混合物中第一抗原的抗原含量的方法。

更具体地，本发明涉及这样的方法，其中包含第二抗原的组合物还包含能够结合第一抗原的抗体。

本发明还涉及测定混合物中第一抗原的抗原含量的方法，所述混合物为至少包含第一抗原的组合物、以及含有(i)第二抗原和(ii)能够结合第一抗原的抗体的组合物的混合物，该方法包括如下步骤，

A解离混合物中第一抗原及抗体间形成的抗原-抗体复合物，和

B通过免疫测定来测定第一抗原的抗原含量。