[发明专利]蛋白质或胜肽的印刷方法、及蛋白质阵列或胜肽阵列、以及功能性蛋白质或功能性胜肽的鉴定方法在审
申请号: | 201180041500.4 | 申请日: | 2011-08-25 |
公开(公告)号: | CN103221539A | 公开(公告)日: | 2013-07-24 |
发明(设计)人: | 一木隆范;马尼许.毕亚尼;塩野博文 | 申请(专利权)人: | 国立大学法人东京大学;株式会社尼康 |
主分类号: | C12N15/00 | 分类号: | C12N15/00;C07K17/14;C12P21/02;G01N37/00 |
代理公司: | 北京中原华和知识产权代理有限责任公司 11019 | 代理人: | 寿宁 |
地址: | 日本*** | 国省代码: | 日本;JP |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 蛋白质 印刷 方法 阵列 以及 功能 性胜肽 鉴定 | ||
1.一种蛋白质或胜肽的印刷方法,其特征在于具有如下步骤:
(a)于由具有特定开口形状的微小凹部构成的微凹版中,于所述微小凹部内准备核酸与无细胞蛋白质合成系统的步骤;
(b)以与在所述微小凹部中合成的下述蛋白质或胜肽相接触的方式将基板与所述微凹版重迭的步骤;
(c)于所述微小凹部内,使用所述无细胞蛋白质合成系统,由所述核酸来合成蛋白质或胜肽,并将所述蛋白质或胜肽沿着所述微小凹部所具有的特定开口形状固定在所述基板上的步骤。
2.根据权利要求1所述的蛋白质或胜肽的印刷方法,其中,所述蛋白质或胜肽含有作为固相结合部位的氨基酸序列,所述基板具有对所述氨基酸序列具有亲和性的固相结合部位识别部位。
3.根据权利要求2所述的蛋白质或胜肽的印刷方法,其中,所述固相结合部位识别部位为镍离子或钴离子。
4.根据权利要求2或3所述的蛋白质或胜肽的印刷方法,其中,所述氨基酸序列为聚组胺酸。
5.一种蛋白质或胜肽的印刷方法,其特征在于具有如下步骤:
(a)于由具有特定开口形状的微小凹部构成的微凹版中,于所述微小凹部内准备核酸、生物素化嘌呤霉素衍生物及无细胞蛋白质合成系统的步骤;
(b)以与在所述微小凹部中合成的下述蛋白质或胜肽相接触的方式将经抗生物素蛋白修饰的基板与所述微凹版重迭的步骤;
(c)于所述微小凹部内,使用所述无细胞蛋白质合成系统,由所述核酸来合成蛋白质或胜肽,并将所述蛋白质或胜肽沿着所述微小凹部所具有的特定开口形状固定在所述基板上的步骤。
6.根据权利要求5所述的蛋白质或胜肽的印刷方法,其中,所述生物素化嘌呤霉素衍生物为以下述通式(1)表示的化合物,
[式中,Z为以下述式(2)、(3)、或(4)表示的基]
[式中,X1及X2中的至少一个为以下述式(5)表示的基,另一个为荧光基或氢原子;*表示键合部位]
[式中,*表示键合部位]。
7.根据权利要求6所述的蛋白质或胜肽的印刷方法,其中,所述Z为以所述式(2)表示的基。
8.根据权利要求1至7中任一项所述的蛋白质或胜肽的印刷方法,其中,所述无细胞蛋白质合成系统仅由经独立纯化的蛋白质合成中的必要因子构成。
9.根据权利要求1至8中任一项所述的蛋白质或胜肽的印刷方法,其中,于所述步骤(a)中,所述核酸为经固相结合部位修饰的DNA,并且是利用经固相结合部位识别部位修饰的磁珠进行固定化的核酸。
10.根据权利要求1至9中任一项所述的蛋白质或胜肽的印刷方法,其中,于所述步骤(a)中,所述核酸是经生物素修饰的DNA,并且是利用经链霉亲和素(Streptavidin)修饰的磁珠进行固定化的核酸。
11.一种蛋白质阵列或胜肽阵列,其特征在于:其是使用根据权利要求1至10中任一项所述的蛋白质或胜肽的印刷方法而制造。
12.一种功能性蛋白质或功能性胜肽的鉴定方法,其特征在于:其是使用根据权利要求11所述的蛋白质阵列或胜肽阵列进行功能性筛选,并使用所述步骤(a)中所对应的微小凹部内的核酸来鉴定通过所述功能性筛选而确定的所述步骤(c)中经固定化的蛋白质或胜肽。
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