[发明专利]胰岛的分离方法及用于保护胰岛组织的保护液

说明书

技术领域

本发明涉及从胰脏分离能够移植的胰岛的方法及在该分离方法中用于保护胰岛组织的保护液。

背景技术

1型糖尿病的根治方法例如有从脑死亡者移植胰脏本身的胰脏移植。所述胰脏移植仅通过1次移植就能脱离胰岛素等，效果好。但是，外科手术复杂、而且伴随血液循环再建，也可能引起并发症，因此存在对患者身体造成很大负担的问题。因此，近年来，胰岛移植作为新的糖尿病根治方法受到关注。所谓胰岛移植，是将作为调节血糖的激素的胰岛素或胰高血糖素的分泌组织即胰岛从胰脏分离，将分离的胰岛从门静脉向肝脏移植的方法。被移植的胰岛成活在肝脏内的门静脉末端，由此分泌胰岛素。

现有的胰脏移植为伴有高侵袭性的外科处置，与此相对，该胰岛移植是在门静脉留置导管，按照静脉滴注的要领移植胰岛进行处置即可，因此与胰脏移植相比，患者身体的负担较轻并且安全。另外，胰岛移植与其他脏器移植不同，其为细胞移植的一种，因此能够将胰岛半永久地冷冻保存。进而，胰岛移植时还存在下述优点：即使发生排斥反应，由于移植的胰岛本身被吸收，所以也无需更换摘除细胞。

另一方面，胰岛移植存在下述缺点，即，由于从胰脏仅分离胰岛细胞在技术上的困难性，所以不能获得适合移植的充分产量的胰岛。结果，需要多次的移植才能实现胰岛素脱离，需要接受来自平均2.6人的供体的胰脏提供。因此，如何能够从胰脏更多地获得质量优异的胰岛成为课题。

为了解决该课题，一直以来研究了各种胰岛分离方法。例如，专利文献1中公开了特征在于将含有蛋白酶抑制剂的保护液预先注入胰管内的胰岛的分离方法。该胰岛的分离方法中的蛋白酶抑制剂用于提高胰岛的产量。

在现有的胰岛分离方法中，不能得到质量及产量充分的胰岛的原因如非专利文献1所公开的那样，是因为存在于胰脏内的来自胰外分泌腺的内源酶由于胰脏的摘出而被活化，损伤胰脏组织，之前的胰岛分离方法通过采取抑制内源酶活性的手段，以求改善胰岛的质量及产量。来自胰外分泌腺的酶有胰蛋白酶、来自胰的弹性蛋白酶、糜蛋白酶等，上述专利文献1中使用特异性抑制胰蛋白酶的乌司他丁。

专利文献1中指出，作为通过蛋白酶抑制剂适当地保护胰岛的组织的结果，胰岛的产量增大。但是，现有的方法在分离的过程中胰岛细胞被撕裂等、通常受到物理损伤，不能以必要的产量稳定地获得在移植后分泌充分的胰岛素的大小和形状的胰岛。另外，专利文献1中，用作蛋白酶抑制剂的乌司他丁是以人尿作为原料的生物来源制剂，也存在对于生物体的风险高、缺乏安全性的问题。

专利文献1：国际公开第2006/068226号

非专利文献1：Transplantation Proceedings，2003，Vol.35，no.7，2455-7

发明内容

因此，本发明的目的在于提供一种胰岛的分离方法及用于保护胰岛组织的保护液，所述胰岛的分离方法能够以高产量获得适合移植的形状及大小的胰岛。

本发明人等在进行本发明时，新发现了若供体的嗜中性粒细胞事先浸润在摘出后的胰脏内，经过消化的工序，则其数量增加，并且从该嗜中性粒细胞释放的嗜中性粒细胞弹性蛋白酶对胰岛造成损伤。因此，发明人等着眼于通过抑制所述嗜中性粒细胞弹性蛋白酶的作用能有效地遏制胰岛的损伤，从而完成了本发明。

本发明涉及以下内容。

[1]一种胰岛的分离方法，包括下述工序：

将摘出的胰脏破坏得到胰组织的消化工序；和

将上述胰组织浸渍在纯化溶液中得到胰岛的纯化工序，

其特征在于，上述消化工序包括下述步骤：

将含有消化酶的酶溶液注入上述胰脏的内部的酶注入步骤；

使上述消化酶活化的消化开始步骤；

使上述消化酶失活的消化停止步骤；和

将已被破坏的胰组织回收的回收步骤，

通过在上述消化开始步骤之前添加嗜中性粒细胞弹性蛋白酶抑制剂，从而在开始上述消化开始步骤的时刻，使嗜中性粒细胞弹性蛋白酶抑制剂存在于上述胰脏的内部。

[2]如[1]所述的胰岛的分离方法，其特征在于，在上述消化工序之前，还包括向摘出的胰脏的胰管内注入保存液的注入工序及/或将上述胰脏浸渍在浸渍液中进行保存的保存工序。

[3]如[1]或[2]所述的胰岛的分离方法，其特征在于，上述嗜中性粒细胞弹性蛋白酶抑制剂的添加通过向上述酶溶液中添加嗜中性粒细胞弹性蛋白酶抑制剂来进行。