[发明专利]人巨细胞病毒感染的检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及人巨细胞病毒感染的检测方法。

背景技术

在以人巨细胞病毒(HCMV)为病因的感染症的血清学诊断中，通常使用病毒抗原(天然抗原)。但在天然抗原中，不可忽视因制备方法而产生的批间差异。另外，由于是处理病毒本身，因此在安全性或简便性上也存在问题。

为了实现HCMV血清学诊断的标准化，人们希望实现抗原的重组化，但在只使用重组抗原时，已知检查的灵敏度、特异性尚不充分。这是由于难以从多个病毒抗原中选择适合重组化的适当的抗原的缘故。除此之外，认为使用各抗原蛋白的部分表达片段也是一个原因。

例如，作为主要的抗原而已知的pp150是分子量为约150kDa的蛋白，因此不可能使用大肠杆菌进行大量合成，且难以在检查中使用全长蛋白。因此，在市售的检查试剂盒中，是将pp150的片段(代表性的是30个残基～40个残基左右)与其他HCMV蛋白片段适当混合用作抗原。但是，有报道称：只使用部分表达片段时，检查的灵敏度为60%左右，并不充分。

但是，还已知：在采用免疫测定的血清检查领域，虽然必需使用全长抗原，但检测灵敏度未必有所提高。例如，在非专利文献1中，对于HCMV的天然抗原(包含全长病毒蛋白)，研究HCMV阳性患者血清组的抗体反应性，并给出了对于每个蛋白评价其抗体反应性的结果，但能够达到接近100%的检测灵敏度的只有pp150，根据蛋白的种类，检测灵敏度变得非常低，达到50%左右以下。

现有技术文献

专利文献

专利文献1：日本特表2000-514300号公报；

非专利文献

非专利文献1：Journal of Clinical Microbiology: 37(1), 第179-188页, 1999。

发明内容

发明所要解决的课题

本发明的目的在于提供：可以高灵敏度地检测HCMV感染的实用性高的新方法。

解决课题的方法

本发明人等合成了15种HCMV蛋白的全长蛋白，并深入研究了其与HCMV感染患者血清的反应性，结果发现：使用pp28全长蛋白作为抗原时，可以无遗漏地检测所有的感染患者，还可以使用大肠杆菌以重组蛋白的形式大量合成、纯化pp28全长蛋白，并将其作为用于检查HCMV的抗原进行商业利用，从而完成了本发明。

即，本发明提供人巨细胞病毒感染的检测方法，该检测方法包括：通过使用人工多肽作为抗原的免疫测定，测定从受试者中分离的样品中所能含有的抗pp28的抗体，所述人工多肽由与SEQ ID NO: 2所示的氨基酸序列具有90%以上同源性的氨基酸序列构成、且具有与针对人巨细胞病毒所产生的pp28而在生物体内诱导的抗体通过抗原抗体反应进行结合的反应性。另外，本发明还提供人巨细胞病毒感染的检测试剂，其中包含人工多肽，所述人工多肽由与SEQ ID NO: 2所示的氨基酸序列具有90%以上同源性的氨基酸序列构成、且具有与针对人巨细胞病毒所产生的pp28而在生物体内诱导的抗体通过抗原抗体反应进行结合的反应性。本发明还提供人巨细胞病毒感染的检测试剂盒，其中包含上述本发明的检测试剂。

发明效果

根据本发明，提供检测灵敏度极其优异的HCMV感染的检测方法。根据本发明，通过简便的免疫测定，可以无遗漏地准确检测所有的HCMV感染患者。在公知的抗体检查方法中，有使用pp28片段作为抗原的方法，例如非专利文献1中还记载着：使用pp28的30个残基左右的大小的片段检测血清中的抗HCMV抗体的方法。但是，根据非专利文献1，使用pp28片段时，在一成以上的患者中出现假阴性。若出现假阴性，则漏掉了感染患者，因此在临床检查中成为重大问题。根据本发明的方法，不会漏掉感染患者，可以准确地进行检测，可以对临床检查作出重大贡献。

附图说明

图1是通过蛋白质印迹确认使用抗体柱纯化在大肠杆菌中表达的pp28重组蛋白的过程的结果。左部分是使用实施例中制备的抗pp28单克隆抗体进行检测的结果，右部分是使用抗大肠杆菌抗原的抗体进行检测的结果。Ma：标记物、元：柱添加前、pass：通过组分、elute：洗脱组分、conc.：浓缩组分。

具体实施方式