[发明专利]对除草剂具有增加的耐受性的植物

权利要求书

1.控制植物栽培位置处不合需要的植被的方法，该方法包括以下步骤：

a)在该位置处提供包含至少一种核酸的植物，所述核酸包含：

(i)编码对香豆酮衍生物除草剂具有抗性或耐受性的野生型羟苯基丙酮酸双加氧酶或突变的羟苯基丙酮酸双加氧酶(mut-HPPD)的核苷酸序列及/或

(ii)编码对香豆酮衍生物除草剂具有抗性或耐受性的野生型尿黑酸茄尼基转移酶或突变的尿黑酸茄尼基转移酶(mut-HST)的核苷酸序列

b)向所述位置处施用有效量的所述除草剂。

2.根据权利要求1的方法，其中(i)的核苷酸序列包含SEQ ID NO：1、3或5的序列，或其变体或衍生物。

3.根据权利要求1的方法，其中(ii)的核苷酸序列包含SEQ ID NO：7或9的序列，或其变体或衍生物。

4.根据权利要求1至3中任一项的方法，其中植物包含至少一种额外的异源核酸，所述核酸包含(iii)编码除草剂耐受性酶的核苷酸序列。

5.根据权利要求1至4中任一项的方法，其中香豆酮衍生物除草剂连同一种或多种其他HPPD及/或HST靶向除草剂一起施用。

6.鉴别香豆酮衍生物除草剂的方法，所述方法通过使用由包含SEQ IDNO：1、3或5的核苷酸序列，或其变体或衍生物的核酸编码的mut-HPPD，及/或通过使用由包含SEQ ID NO：7或9的核苷酸序列，或其变体或衍生物的核酸编码的mut-HST来进行鉴别。

7.根据权利要求6的方法，其包括以下步骤：

a)生成包含编码mut-HPPD的核酸的转基因细胞或植物，其中表达mut-HPPD；

b)向a)的转基因细胞或植物及向相同品种的对照细胞或植物施用香豆酮衍生物；

c)在施用所述测试化合物之后，测定转基因细胞或植物及对照细胞或植物的生长或生存力，及

d)较之转基因细胞或植物的生长，选择赋予对照细胞或植物降低的生长的测试化合物。

8.鉴别编码对香豆酮衍生物除草剂具有抗性或耐受性的mut-HPPD的核苷酸序列的方法，该方法包括：

a)生成mut-HPPD编码核酸的文库，

b)通过在细胞或植物中表达每种所述核酸并用香豆酮衍生物处理所述细胞或植物，来筛选所得mut-HPPD编码核酸的群体，

c)比较由所述mut-HPPD编码核酸群体提供的“香豆酮衍生物”耐受性水平与由对照HPPD编码核酸提供的“香豆酮衍生物”耐受性水平，

d)较之由对照HPPD编码核酸提供的对“香豆酮衍生物”的耐受性水平，选择提供对“香豆酮衍生物”的耐受性水平显著增加的至少一种mut-HPPD编码核酸。

9.根据权利要求8的方法，其中较之由对照HPPD编码核酸所提供的对香豆酮衍生物除草剂的耐受性，在步骤d)中选择的mut-HPPD编码核酸提供至少2倍的对香豆酮衍生物除草剂的耐受性。

10.根据权利要求8或9的方法，其中通过生成包含步骤a)的文库的核酸序列的转基因植物并比较所述转基因植物与对照植物来测定抗性或耐受性。

11.编码mut-HPPD的经分离的核酸，其中核酸能够通过如权利要求8至10中任一项所定义的方法鉴别。

12.根据权利要求11的核酸，其中被编码的mut-HPPD为SEQ ID NO：2的变体，其包括下述中的一个或多个：位置293的氨基酸不为谷氨酰胺；位置335的氨基酸不为甲硫氨酸；位置336的氨基酸不为脯氨酸；位置337的氨基酸不为丝氨酸；氨基酸位置363不为谷氨酸；位置422的氨基酸不为甘氨酸；位置385的氨基酸不为亮氨酸；及/或氨基酸位置393不为异亮氨酸。

13.由野生型或mut-HPPD核酸转化的转基因植物细胞，其中较之野生型品种的植物细胞，核酸在植物细胞中的表达导致对香豆酮衍生物除草剂的增加的抗性或耐受性。