[发明专利]筛选方法、由其确定的组合物、可用于其确定的工具和由其生产的细胞群

权利要求书

1.确定细胞亚群（一种或多种）的短期和/或长期体外培养基的方法，其中所述细胞亚群（一种或多种）选自：

在移植到动物模型中时能重演肿瘤的细胞亚群（一种或多种）；

具有致瘤活性并呈现干细胞样性质的细胞亚群（一种或多种）；

具有一种或多种指示异常行为的分子标记的细胞亚群（一种或多种）；

在暴露于一种或多种用于治疗过度增生性疾病的药剂后抵抗药物治疗的细胞亚群（一种或多种）；和

在无血清细胞培养基存在的情况下悬浮生长的细胞亚群（一种或多种），所述无血清细胞培养基包含如下中的一种或多种：bFGF、EGF、牛血清白蛋白、白血病抑制因子、神经元存活因子、胰岛素、人类转铁蛋白；

以及其任意两种或更多种的组合，

所述方法包括：

创建多个复合微环境，其中各复合微环境包括多种组分，

针对所述多个复合微环境筛选所述细胞亚群（一种或多种），和

选择促进所述细胞亚群（一种或多种）短期和/或长期体外培养的那些复合微环境。

2.权利要求1所述的方法，其中构成各复合微环境的所述多种组分中的一种或多种密切类似于在所述细胞亚群（一种或多种）通常所处的体内环境中或所述细胞群（一种或多种）的来源物种的同源物种的体内环境中发现的组分（一种或多种）。

3.权利要求所述的方法1，其中所述多个微环境包括选自如下的两种或更多种组分的多因子阵列：胞外基质蛋白或其组分、细胞粘附分子、单糖、寡糖、多糖、糖蛋白、蛋白聚糖、非蛋白聚糖的多糖、细胞通信分子、复合碳水化合物、脂质、维生素及其代谢物、天然存在的低分子量生物活性分子、合成的低分子量生物活性分子、多肽、合成的聚合物、生物聚合物、抗体、核酸、无机盐和培养基补充物。

4.权利要求3所述的方法，其中所述细胞通信分子选自生长因子、信号传导分子、激素和细胞因子。

5.前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述细胞亚群在移植到动物模型中时能重演肿瘤。

6.前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述细胞亚群具有致瘤活性并呈现干细胞样性质。

7.前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述细胞亚群具有一种或多种指示异常行为的分子标记。

8.权利要求7所述的方法，其中所述具有一种或多种指示异常行为的分子标记的细胞选自表达CD44+/CD24-、CXCR4+、CD133+、CD138-、CD20、α2βl+、CD44+、EpCam+、Cdl66+、LGR5、和CD24+、及其任意两种或更多种的组合的细胞。

9.前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述细胞亚群在暴露于一种或多种用于治疗过度增生性疾病的药剂后抵抗药物治疗。

10.权利要求9所述的方法，其中所述用于治疗过度增生性疾病的药剂选自阿拉伯糖胞嘧啶（ARA-C）、阿糖胞苷、博莱霉素、马利兰、卡培他滨、卡铂、卡莫司汀、苯丁酸氮芥、顺铂、环磷酰胺、达卡巴嗪、柔红霉素、多西紫杉醇、阿霉素、表柔比星、依托泊苷、氟达拉滨、5-氟尿嘧啶、吉西他滨、羟基脲、伊达比星、异环磷酰胺、伊立替康、洛莫司汀、二氯甲基二乙胺、美法仑、6-巯基嘌呤（6-MP）、氨甲喋呤、丝裂霉素、C-米托蒽醌、奥沙利铂、紫杉醇、链脲菌素、替莫唑胺、6-硫鸟嘌呤、拓扑替康、长春碱、长春新碱、长春碱酰胺、长春瑞滨、阿仑单抗、贝伐单抗、吉妥单抗、替伊莫单抗、利妥昔单抗、托西莫单抗、曲妥珠单抗、阿地白介素、IL-2、α干扰素、咪喹莫特、来那度胺、阿那曲唑、比卡鲁胺、依西美坦、氟他胺、氟维司群、来曲唑、甲地孕酮、雷洛昔芬、他莫昔芬和托瑞米芬。

11.前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述细胞亚群在无血清细胞培养基存在的情况下悬浮生长，所述无血清细胞培养基包含bFGF、EGF、牛血清白蛋白、白血病抑制因子、神经元存活因子、胰岛素和人类转铁蛋白中的一种或多种。

12.权利要求11所述的方法，其中在无血清细胞培养基存在的情况下生长的所述细胞在悬浮培养中作为球体生长，并能够在胎牛血清存在的情况下分化成为粘附细胞，所述无血清细胞培养基包含bFGF、EGF、牛胰岛素和人类转铁蛋白中的一种或多种。