[发明专利]沉默调节蛋白活化剂和活化测定

权利要求书

1.一种检测在体外激活沉默调节蛋白脱乙酰基酶对不含荧光基团的活化底物的活性的化合物的方法，其包括：

将沉默调节蛋白脱乙酰基酶与候选化合物以及不含荧光基团的活化底物接触，所述活化底物包括沉默调节蛋白的乙酰基化的肽、多肽或蛋白底物；

检测在候选化合物的存在下沉默调节蛋白脱乙酰基酶对不含荧光基团的活化底物的活性水平；和

比较在候选化合物的存在下沉默调节蛋白脱乙酰基酶对不含荧光基团的活化底物的活性水平与不存在候选化合物时沉默调节蛋白脱乙酰基酶对不含荧光基团的活化底物的活性水平，

其中与不存在候选化合物时沉默调节蛋白脱乙酰基酶对不含荧光基团的活化底物的活性水平相比，在候选化合物的存在下沉默调节蛋白脱乙酰基酶对不含荧光基团的活化底物的活性水平增加表明该化合物为沉默调节蛋白活化剂。

2.权利要求1的方法，其中所述沉默调节蛋白脱乙酰基酶为SIRT1。

3.权利要求1的方法，其中所述沉默调节蛋白脱乙酰基酶选自SIRT2、SIRT3、SIRT4和SIRT5。

4.权利要求1的方法，其中所述候选化合物为含有荧光基团的乙酰基化的肽或多肽底物的SIRT1活化剂。

5.权利要求4的方法，其中所述含有荧光基团的肽底物为TAMRA-肽:Ac-EEK^(生物素)GQSTSSHSK^AcNleSTEGK^(5-TMR)EE-NH₂。

6.权利要求1的方法，其中在NAD的存在下将所述沉默调节蛋白脱乙酰基酶与不含荧光基团的活化底物和候选化合物接触。

7.权利要求1的方法，其中在可水解的NAD类似物的存在下将所述沉默调节蛋白脱乙酰基酶与不含荧光基团的活化底物和候选化合物接触。

8.权利要求1的方法，其中所述不含荧光基团的活化底物为生物素化的多肽。

9.权利要求1的方法，其中所述不含荧光基团的活化底物为desTAMRA-肽:Ac-EEK^(生物素)GQSTSSHSK^AcNleSTEGKEE-NH₂。

10.权利要求1的方法，其中所述不含荧光基团的活化底物为不含荧光基团TAMRA(四甲基-6-羧基罗丹明)和AMC(7-氨基-4-甲基香豆素)的乙酰基化的肽或多肽。

11.权利要求1的方法，其中所述不含荧光基团的活化底物为选自Ac-RHKK^AcF-NH₂和Ac-RHKK^AcW-NH₂的乙酰基化的肽。

12.权利要求1的方法，其中所述不含荧光基团的活化底物包括沉默调节蛋白的乙酰基化的肽、多肽或蛋白底物和携带活化辅因子的辅助蛋白。

13.权利要求12的方法，其中所述携带活化辅因子的辅助蛋白选自DBC1(乳腺癌缺失基因1)、HIC1(癌症过度甲基化基因1)、AROS(SIRT1的活化调节剂)和CLOCK。

14.权利要求1的方法，其中所述乙酰基化的蛋白选自组蛋白H1、组蛋白H3、组蛋白H4、p53、p300、FOXO 1、FOXO 3a、FOXO 4、p65、HIVTat、PGC-1α、PCAF、MyoD、PPARγ和Ku70。

15.权利要求1的方法，其中通过测量NAD水解的速率检测沉默调节蛋白脱乙酰基酶活性水平。

16.权利要求1的方法，其中通过测量不含荧光基团的活化底物脱乙酰基化的速率检测沉默调节蛋白脱乙酰基酶活性水平。

17.权利要求1的方法，其中所述化合物为不含荧光基团的活化底物的SIRT1脱乙酰基化的活化剂。