[发明专利]筛选抗体的方法

权利要求书

1.一种生成用于抗体筛选试验的抗体偶联物的方法，所述方法包含以下步骤：

提供第一和第二包含抗体的样品，其中所述第一和第二包含抗体的样品中抗体数量和抗体序列不相同，前提是所述第一样品中的所有抗体基本具有相同序列，并且所述第二样品中的所有抗体基本具有相同序列；

在固体支持物上固定所述抗体以提供包含固定抗体的第一和第二样品；

充分还原所述固定抗体的可还原二硫键以提供包含经还原固定抗体的第一样品和包含经还原固定抗体的第二样品，其中所述还原对所述可还原二硫键有选择性；

还原的固定抗体与封端剂、药物或药物接头和可选的检测剂反应以提供固定抗体偶联物，其中所述封端剂、药物或药物接头和可选的检测剂与活性巯基选择性反应，所述封端剂、药物或药物接头和可选的检测剂以摩尔过量提供，并且选择封端剂、药物或药物接头和可选检测剂的比率以实现所需药物加载水平；和

洗脱所述抗体偶联物以提供第一和第二抗体药物偶联组合物。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述可还原二硫键是所述抗体的天然链间二硫键。

3.如权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述第一和第二包含抗体的样品中所述抗体有相同数目的可还原二硫键，并且所述还原的固定抗体接触相同比率的封端剂、药物或药物接头和可选检测剂。

4.如权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述第一和第二包含抗体的样品中所述抗体有不同数目的可还原二硫键，并且所述还原的固定抗体接触不同比率的封端剂、药物或药物接头和可选检测剂。

5.如前述权利要求中任一项所述的方法，其特征在于，所述还原的固定抗体与检测剂反应。

6.如权利要求5所述的方法，其特征在于，所述检测剂是荧光团，并且所得抗体偶联组合物有每个抗体约3个荧光团的平均荧光加载。

7.如前述权利要求中任一项所述的方法，其特征在于，洗脱所述抗体偶联物后，测定所述抗体偶联组合物中的实际抗体数量或相对抗体数量。

8.如前述权利要求中任一项所述的方法，其特征在于，所述包含抗体样品中的所述抗体在固定前不纯。

9.如前述权利要求中任一项所述的方法，其特征在于，所述包含抗体样品中所述抗体的数量在固定、还原、偶联和洗脱前未知。

10.如前述权利要求中任一项所述的方法，其特征在于，所述包含抗体样品具有存在于所述样品的1μg-100μg抗体。

11.如前述权利要求中任一项所述的方法，其特征在于，所述包含抗体样品具有存在于所述样品的1μg-50μg抗体。

12.如前述权利要求中任一项所述的方法，其特征在于，所述包含抗体样品具有存在于所述样品的1μg-20μg抗体。

13.如前述权利要求中任一项所述的方法，其特征在于，所述包含抗体样品的所述抗体来自相同种。

14.如前述权利要求中任一项所述的方法，其特征在于，所述封端剂、药物或药物接头和检测剂包含马来酰亚胺基团。

15.如前述权利要求中任一项所述的方法，其特征在于，所述样品之间的药物接头加载基本统一。

16.如权利要求15所述的方法，其特征在于，所述抗体偶联组合物的平均药物接头加载为每个抗体约4个药物接头。

17.如前述权利要求中任一项所述的方法，其特征在于，所述包含抗体样品是细胞培养上清样品。

18.如权利要求17所述的方法，其特征在于，所述细胞培养上清是未纯化的杂交瘤细胞培养上清。

19.如权利要求17所述的方法，其特征在于，所述细胞培养上清是未纯化的CHO细胞培养上清。

20.如权利要求17、18或19中任一项所述的方法，其特征在于，用于抗体生产的几乎所有细胞培养基是缺乏IgG的培养基。

21.如权利要求17、18、19或20中任一项所述的方法，其特征在于，所述固体支持物加入到所述细胞培养物上清中。