[发明专利]从微生物生物质中获得包含多不饱和脂肪酸的组合物的方法

说明书

本申请要求提交于2010年4月22日的美国临时专利申请61/326,793的优先权，将该专利的全文以引用的方式并入本文中。

发明领域

本发明涉及用包含二氧化碳的溶剂提取破碎的微生物生物质并分级来获得精制的脂质组合物的方法，所述精制的脂质组合物包含至少一种多不饱和脂肪酸且富含三酰基甘油。

发明背景

对在药物和膳食产品中包括多不饱和脂肪酸(PUFA)如二十碳五烯酸(EPA；ω-3)和二十二碳六烯酸(DHA；ω-3)的兴趣一直在持续地增长。可例如从天然微生物来源、从重组微生物、或从鱼油和海洋浮游生物中获得包含PUFA的脂质组合物。认为包含PUFA的脂质组合物在某些条件下是氧化不稳定的，这需要消耗可观的精力以获得未氧化的组合物。

美国专利公开4,675,132公开了浓缩鱼油中的PUFA部分的方法，所述鱼油包含相对低比例的饱和和单不饱和脂肪酸部分，其链长与拟浓缩的PUFA部分相同，包含具有低级链烷醇的酯交换鱼油甘油酯以形成低级烷基脂肪酸酯的混合物，并在超临界条件下用二氧化碳(CO₂)提取所述酯。

开发用于产生高浓度EPA的连续逆流超临界CO₂分级方法的工艺流程图由V.J.Krukonis等人(Adv.Seafood Biochem.，Pap.Am.Chem.Soc.Annu.Meet.(1992)，召开年份：1987，169-179)公开。该方法的原料是鲱油的尿素结晶乙酯，并且该设计的基础是在90％的产量下产物浓度为90％EPA(乙酯)。

美国专利公开6,727,373公开了包含PUFA的微生物油，其具有高甘油三酯含量和高氧化稳定性。此外，描述了一种从来源于经巴氏消毒的发酵液的微生物生物质中回收此类油的方法，其中所述微生物生物质经挤出形成颗粒、干燥、然后使用合适溶剂从干燥颗粒中提取所述油。

寻找其中可在包含PUFA的脂质组合物中调节三酰基甘油、二酰基甘油、单酰基甘油和游离脂肪酸的分配的方法。期望获得包含PUFA的脂质组合物的方法，所述组合物具有改善的氧化稳定性。也期望获得富含三酰基甘油的包含PUFA的脂质组合物的方法，该方法是用于获得此类组合物的经济型方法。

发明概述

在第一实施方案中，本发明提出了方法，所述方法包括以下步骤：

a)用包含液体或超临界流体二氧化碳的溶剂加工未处理的破碎的微生物生物质，所述未处理的破碎的微生物生物质具有包含至少一种多不饱和脂肪酸的油组合物，以获得：

(i)包含基本上不含磷脂的脂质级份的提取物；和，

(ii)包含磷脂的残余生物质；以及，

b)分级在步骤(a)的部分(i)中获得的提取物至少一次以获得包含至少一种多不饱和脂肪酸的精制的脂质组合物，其中所述精制的脂质组合物相对于所述未处理的破碎的微生物生物质的油组合物富含三酰基甘油。

在第二实施方案中，所述富含三酰基甘油的精制的脂质组合物包含至少一种脂质组分，所述脂质组分选自：二酰基甘油、单酰基甘油、游离脂肪酸、以及它们的组合。

在第三实施方案中，所述富含三酰基甘油的精制的脂质组合物相对于所述未处理的破碎的微生物生物质富含至少一种多不饱和脂肪酸。

在第四实施方案中，本发明的方法还包括选自以下的步骤：

a)分级在步骤(a)的部分(i)中获得的提取物以获得包含至少一种多不饱和脂肪酸的精制的脂质组合物，其中所述精制的脂质组合物相对于所述未处理的破碎的微生物生物质的油组合物富含脂质组分，所述脂质组分选自：二酰基甘油、单酰基甘油、游离脂肪酸、以及它们的组合；以及，

b)用提取剂加工步骤(a)的部分(ii)的包含磷脂的残余生物质以获得基本上由磷脂组成的残余生物质提取物。

在第五实施方案中，步骤(a)的加工在约20℃至约100℃的温度下和在约60巴至约800巴的压力下进行。步骤(b)的分级通过改变所述分级条件的温度、压力、或温度和压力执行。

在第六实施方案中，步骤(a)的加工溶剂包含超临界流体二氧化碳，并且步骤(b)的分级在约35℃至约100℃的温度下和在约80巴至约600巴的压力下进行。

在第七实施方案中，所述未处理的破碎的微生物生物质包含含油微生物细胞。