[发明专利]亲和色谱用填充剂

说明书

技术领域

本发明涉及亲和色谱用填充剂。尤其涉及含有蛋白质的动态结合容量高且压力特性优异的多孔粒子的、对蛋白质纯化有用的亲和色谱用填充剂。

背景技术

亲和色谱法在包括单克隆抗体的蛋白质的研究、开发和制造中承担着重要的作用。亲和色谱用填充剂一般包含具有选择性地与靶分子结合的配体的固相载体。就亲和色谱法而言，固相载体上的配体对于靶分子具有高选择性，因此，与离子色谱法、凝胶过滤色谱法、反相液体色谱法等其它色谱法相比，可以进行收率优异以及高速且经济的纯化。

亲和色谱用填充剂的固相载体主要使用琼脂糖粒子（专利文献1、2）。琼脂糖粒子由于其高亲水性，因此配体的活性高，对于靶分子的动态结合容量高。

作为其它亲和色谱用填充剂的固相载体，有时使用由苯乙烯-二乙烯基苯的聚合物形成的多孔粒子（专利文献3、4）。由苯乙烯-二乙烯基苯这样的乙烯基单体的聚合物形成的多孔粒子一般来说弹性模量高，压力特性优异。

另外，为了兼顾亲和色谱用填充剂中的高动态结合容量和压力特性，也提出了将琼脂糖这样的糖链结合于由乙烯基单体的聚合物形成的多孔粒子的细孔而得到的粒子（专利文献5）。

另一方面，虽然有将由含有羟基的交联性乙烯基单体的聚合物形成的多孔粒子用于色谱法的例子，但它们均仅适合于以分析为目的的凝胶过滤色谱法、反相液体色谱法（专利文献6～8）。

专利文献1：日本特表2008-523140号公报

专利文献2：日本特表2009-522580号公报

专利文献3：日本特开平8-278299号公报

专利文献4：日本特表平10-501173号公报

专利文献5：日本特开2008-232764号公报

专利文献6：日本特开2002-239380号公报

专利文献7：日本特开2003-176363号公报

专利文献8：日本特开2000-187028号公报

发明内容

但是，琼脂糖粒子一般弹性模量低，因此具有在高速流过介质时柱的压力变高这个缺点，从而压力特性较差。另外，琼脂糖粒子一般是从天然的海草经过长的复杂工序而制造成的，因此具有难以获得恒定质量的琼脂糖粒子这个缺点。另一方面，由苯乙烯-二乙烯基苯这样的乙烯基单体的聚合物形成的多孔粒子的亲水性低，因此，配体的活性低，从而具有对靶分子的动态结合容量低这个缺点。另外，将琼脂糖这样的糖链结合于由乙烯基单体的聚合物形成的多孔粒子的细孔而得到的粒子与琼脂糖粒子同样地是经过长的复杂工序而制造成的，因此，具有可以作为亲和色谱使用的质量的粒子昂贵、或难以获得恒定质量的粒子的缺点。进而，在现有的凝胶过滤色谱法、反相液体色谱法中使用的、由含有羟基的交联性乙烯基单体的聚合物形成的多孔粒子不能达到兼顾作为亲和色谱用填充剂的高动态结合容量和压力特性。

于是，本发明的目的在于提供蛋白质的动态结合容量高、压力特性也优异、对蛋白质纯化有用的亲和色谱用填充剂。

本发明的一个方式所涉及的亲和色谱用填充剂其特征在于，具有：

由乙烯基单体的聚合物形成的多孔粒子，所述乙烯基单体包括：含有羟基且不含有环氧基的交联性乙烯基单体和含有环氧基的非交联性乙烯基单体、或者含有羟基和环氧基的交联性乙烯基单体，

结合于上述多孔粒子的配体，以及

开环环氧基。

在上述亲和色谱用填充剂中，上述配体可以是含有至少1个蛋白A、蛋白A的免疫球蛋白结合域、或者其变异体的蛋白质。

在上述亲和色谱用填充剂中，上述乙烯基单体可以由以下构成：

（X-1）含有羟基且不含有环氧基的交联性乙烯基单体20～90质量份、

（X-2）不含有羟基和环氧基的交联性乙烯基单体0～40质量份、

（M-1）含有环氧基的非交联性乙烯基单体1～40质量份、以及

（M-2）不含有环氧基的非交联性乙烯基单体0～70质量份

（其中，（X-1）、（X-2）、（M-1）和（M-2）的合计是100质量份）。

在上述亲和色谱用填充剂中，上述开环环氧基可以利用硫甘油使上述聚合物所含有的环氧基开环而获得。