[发明专利]干扰素α5的制备方法

权利要求书

1.一种在大肠杆菌宿主细胞中通过表达来生产干扰素α5(IFNa5)蛋白质的方法，其包括：

a）提供一种产生IFNa5的大肠杆菌宿主细胞；

b）在通过所述产生IFNa5的重组大肠杆菌宿主细胞中有效表达所述IFNa5蛋白的条件下，在发酵培养基中培养该产生IFNa5的大肠杆菌宿主细胞，所述培养基添加碳料液，其中

-所述发酵培养基不含动物来源或酵母来源的成分，并且

-所述碳料液包含碳源和每升添加的碳料液中大约3.0至大约3.7mL的微量元素溶液；以及

c）分离，以及任选地纯化，表达的IFNa5蛋白质。

2.根据权利要求1的方法，其中大肠杆菌宿主细胞用包含在诱导型启动子调控下的IFNa5蛋白质的编码序列的载体来进行转化。

3.根据权利要求1或2的方法，其中大肠杆菌宿主细胞是大肠杆菌蛋白酶缺陷型菌株，优选地，大肠杆菌Ion^-/ompT^-蛋白酶缺陷型宿主菌株，更优选地，大肠杆菌BL21菌株，最优选地，大肠杆菌BL21 ( DE3)菌株。

4.根据权利要求3的方法，其中大肠杆菌宿主细胞是大肠杆菌BL21 ( DE3)菌株，并且步骤b）的条件中包括使用IPTG诱导。

5.根据权利要求4的方法，其中在诱导之后的特定的培养物生长率(μ)等于或高于0.17。

6.根据权利要求1的方法，其中所述微量元素选自由铁、钙、锌、锰、铜、钴、钼、硼和其组合组成的微量元素组中。

7.根据权利要求1或6的方法，其中包含在所述碳料液中的微量元素溶液包含氯化铁(III)、氯化钙、硫酸锌(II)、硫酸锰(II)、硫酸铜(II)、氯化钴(II)、钼酸钠、硼酸或其组合。

8.根据权利要求1的方法，其中所述IFNa5蛋白质是hIFNa5。

9.根据权利要求1的方法，其中编码IFNa5蛋白质的序列包括如SEQ ID NO：1所示的核酸序列。

10.根据权利要求1的方法，其中从包含所述包涵体(IB)形式的IFNa5蛋白质的混合物中分离并且任选地纯化IFNa5蛋白质，通过将所述IB进行增溶来形成包含变性IFNa5的混合物，随后进行氧化复性处理过程形成包含复性IFNa5的混合物，并且对包含所述复性IFNa5的混合物进行纯化从而获得纯化的IFNa5。

11.根据权利要求10的方法，其中包含复性IFNa5的混合物通过将所述混合物进行4-步色谱处理方法来纯化，其包括：

1）将所述包含复性IFNa5的混合物进行疏水作用层析；

2）将步骤1）获得的溶液进行阴离子交换色谱；

3）将步骤2）获得的溶液进行第一阳离子交换色谱；以及

4）将步骤3）获得的溶液进行第二阳离子交换色谱，其中所述溶液任选地，用包含甲硫氨酸的缓冲液进行稀释。