[发明专利]人工皮肤

说明书

技术领域

本发明涉及通过使用基质金属蛋白酶抑制剂和乙酰肝素酶抑制剂的人工皮肤的新的制造方法、以及通过该方法制造的新的人工皮肤。

背景技术

覆盖以人类为代表的各种动物的整个身体的皮肤处于由日光、干燥、氧化、环境造成的压力、精神压力等外界因素以及年龄增长所引起的皱纹的形成、硬化、斑、暗沉、弹性的降低等变化中。

在天然皮肤中，大地分类由表皮和真皮这两层构成，在表皮与真皮之间存在被称为表皮基底膜的薄且纤细的膜。表皮基底膜为约0.1μm左右的非常薄的结构体，片状地存在于表皮与真皮的接合部。表皮基底膜由作为基本结构的致密层(lamina densa)和透明层(lamina densa)、以及角质形成细胞的半桥粒、锚丝(anchoring filament)、锚纤维等构成，特别是该基本结构由IV型胶原、各种层粘连蛋白(laminin)、和蛋白聚糖等构成。结合着表皮基底细胞与基本结构、特别是致密层的锚丝的主要成分为层粘连蛋白5，基本结构与真皮的胶原纤维通过以VII型胶原为主成分的锚纤维被连结。此外，锚丝与锚纤维可以彼此结合，它们形成被称为锚复合体的复合体。通过这样的结构，生物体的最外层存在的皮肤保持抵御来自外界的力学压力的强度(化妆品事典,日本化妆品技术者会编,p405-406)。

然而，在由于某种原因而天生的皮肤(即，天然皮肤)受到损伤的情况下，作为其代替物的人工皮肤的需求提高。此外，作为用于测试药品、化妆品对皮肤的作用、药物的实验材料，人工皮肤的开发也是极其重要的，在任一用途中都强烈期望尽可能模仿天然皮肤的结构的人工皮肤。

作为以往的人工皮肤的制造方法，已知在包含人成纤维细胞的收缩I型胶原凝胶上培养正常人表皮角质形成细胞而形成表皮层的方法。然而，在该方法中，在模仿真皮的胶原凝胶与模仿表皮的表皮层之间不能充分地形成基底膜，因此在使用这样的人工皮肤的情况下，通过施与基质金属蛋白酶抑制剂、或基质金属蛋白酶抑制剂和基质蛋白质产生增强剂这两者，从而促进皮肤基底膜结构的再形成(日本特开2001-269398号公报)。此外，已知抑制丝氨酸蛋白酶的物质以及提高作为表皮基底膜成分的主要构成成分的IV型、VII型胶原或层粘连蛋白5的产生量的物质会促进由基质蛋白酶抑制剂产生的促进基底膜形成的效果(日本特开2004-75661号公报)。然而，在通过这样的现有技术制造的人工皮肤中，表皮基底膜与真皮的高级结构的形成仍然不成熟，不能说充分地实现了表皮基底膜与真皮间的通讯。

此外，已知抑制乙酰肝素酶活性的化合物在皮肤的皱纹形成过程中改善生物体内的基底膜功能，由此抑制皱纹的形成(WO 2009/123215号)，但是关于通过使该化合物与基质金属蛋白酶抑制剂进行组合，来促进人工皮肤的表皮基底膜和真皮的再形成，并不知道。

现有技术文献

专利文献

专利文献1：日本特开2001-269398号公报

专利文献2：日本特开2004-75661号公报

专利文献3：WO2009/123215号

发明内容

发明要解决的课题

本发明的目的是提供充分地实现了表皮基底膜与真皮间的通讯，无限地接近天然皮肤的结构的人工皮肤。

用于解决课题的方法

此次，本发明人在包含来源于人表皮的角质形成细胞和来源于人真皮的成纤维细胞的形成人工皮肤的培养基中添加基质金属蛋白酶抑制剂和乙酰肝素酶抑制剂，对该培养基中的细胞进行培养，从而形成了人工皮肤，结果成功地获得表皮基底膜和真皮的高级结构极其近似于天然皮肤的人工皮肤。

因此，本申请包含以下的发明：

[1]一种人工皮肤的制造方法，其包括：在包含来源于人表皮的角质形成细胞和来源于人真皮的成纤维细胞的形成人工皮肤的培养基中添加基质金属蛋白酶抑制剂和乙酰肝素酶抑制剂，对该形成人工皮肤的培养基中的细胞进行培养，从而形成人工皮肤。

[2]一种人工皮肤，其特征在于，包含：含有连续的致密层和从该致密层产生的锚纤维的表皮基底膜、和含有胶原纤维的真皮，通过所述表皮基底膜中存在的从连续的致密层产生的锚纤维与真皮中存在的胶原纤维进行结合，从而表皮基底膜与真皮被牢固地粘接。

[3]根据上述[2]所述的人工皮肤，所述真皮还包含原纤维沉积物(fibripositor)。

[4]根据上述[2]或[3]所述的人工皮肤，其特征在于，在所述真皮中形成有弹性蛋白纤维。