[发明专利]纯化肽的制备性RP-HPLC方法在审
| 申请号： | 201180011823.9 | 申请日： | 2011-03-01 |
| 公开（公告）号： | CN102770440A | 公开（公告）日： | 2012-11-07 |
| 发明（设计）人： | X.吴;A.博格斯内斯 | 申请（专利权）人： | 诺沃—诺迪斯克有限公司 |
| 主分类号： | C07K1/20 | 分类号： | C07K1/20 |
| 代理公司： | 中国专利代理(香港)有限公司 72001 | 代理人： | 孔青;权陆军 |
| 地址： | 丹麦*** | 国省代码： | 丹麦;DK |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 纯化 制备 rp hplc 方法 | ||
1. 在RP-HPLC系统上将液体混合物中的目标多肽与至少一种不想要的成分分离的方法，所述方法包括：
a.在RP-HPLC系统中引入含有目标多肽的混合物，该混合物溶解于流动相，其中该流动相的pH值与目标多肽的pI值相差至少1个单位；
b.将流动相的pH调节至与目标多肽的pI值相差小于1个单位的pH值，其中调节pH通过分段过程或采用pH梯度进行；
c.洗脱目标多肽从而获得其纯化的组合物。
2. 如权利要求1所述的方法，在步骤b和步骤c之间增加一个步骤，其中，pH再次被调节至与待纯化的肽或蛋白质的pI值相差至少1个单位的pH值，其中所述调节通过分段过程或采用pH梯度进行。
3. 如权利要求1或2所述的方法，其中所述步骤a中的pH值高于待纯化的肽或蛋白质的pI值。
4. 如前述权利要求任一项所述的方法，其中所述步骤a中的pH值为5.5-9.0。
5. 如前述权利要求任一项所述的方法，其中所述步骤b中的pH值为3.5-5.5。
6. 如前述权利要求任一项所述的方法，其中所述步骤b中流动相pH的调节采用pH梯度进行。
7. 如前述权利要求任一项所述的方法，其中所述方法包括与步骤b同时应用有机修饰物梯度，以去除不想要的杂质而同时在RP-HPLC系统上保留目标肽。
8. 如权利要求7所述的方法，其中所述步骤b中有机修饰物梯度为约25%-约48%，且流动相pH的调节采用pH 7.4-4.5的pH梯度进行。
9. 如前述权利要求任一项所述的方法，其中所述步骤b中将流动相的pH由约7.4调节至约4.5。
10. 如前述权利要求任一项所述的方法，其中所述反相胶上的温度为20-70℃。
11. 如前述权利要求任一项所述的方法，其中RP-HPLC系统中使用的吸附剂选自：取代的二氧化硅例如C-4二氧化硅、C-6二氧化硅、C-12二氧化硅、C-18二氧化硅和基于苯基的二氧化硅，聚合体材料例如聚苯乙烯、膜、整体材料和过滤器。
12. 如权利要求7-11中任一项所述的方法，其中所述有机修饰剂选自乙醇、甲醇、丙醇和乙腈。
13. 如前述权利要求任一项所述的方法，其中所述目标多肽为适用于治疗糖尿病的多肽。
14. 如前述权利要求任一项所述的方法，其中所述目标多肽是胰高血糖素样肽或GLP-1激动剂。
15. 如前述权利要求任一项所述的方法，其中所述至少一种不想要的成分是所述多肽的其它形式，例如是所述多肽的糖基化形式、脱酰胺形式或氧化形式。
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