[发明专利]抗铜绿假单胞菌E血清型脂多糖的抗体

说明书

技术领域

本发明涉及一种抗铜绿假单胞菌E血清型脂多糖的抗体及其应用。更具体地，本发明涉及一种特异性地结合于铜绿假单胞菌菌株E血清型脂多糖的抗体，以及各自均包括任意所述抗体的一种药物组合物、一种用于铜绿假单胞菌感染的诊断剂和一种铜绿假单胞菌检测试剂盒。

背景技术

铜绿假单胞菌（Pseudomonas aerugiNOsa）是一种革兰氏阴性需氧杆菌，其广泛而普遍地分布于自然环境中，例如土壤和水中。铜绿假单胞菌是一种通常对健康受试者来说是非致病性的无致病力细菌（avirulent bacterium），所述健康受试者对铜绿假单胞菌具有适度的抗体效价以及足够的免疫功能。然而，一旦体弱患者感染了铜绿假单胞菌，铜绿假单胞菌可引起严重的症状，这可导致所述患者死亡。为此，铜绿假单胞菌作为医院感染和机会感染的一种主要致病细菌已引起关注，并因此对铜绿假单胞菌感染的预防和治疗已经是医疗领域的重要问题。

为了预防或治疗铜绿假单胞菌感染，已主要使用了抗生素或合成抗菌剂。但是，铜绿假单胞菌对此类药物产生了抗药性，因此此类药物在许多情况下不能提供足够的治疗作用。具体而言，用抗生素等治疗耐多药铜绿假单胞菌（MDRP）的感染很难，且具有局限性。为此，作为其替代方法，已实施使用免疫球蛋白制剂的治疗。

同时，已检验了使用抗铜绿假单胞菌的抗体预防或治疗铜绿假单胞菌感染。例如，已开发了每种均特异性地结合特定血清型的铜绿假单胞菌菌株的抗体（专利文献1-5，以及非专利文献1和2）。然而，迄今为止所开发的铜绿假单胞菌抗体在预防或治疗铜绿假单胞菌感染中尚不能提供足够的作用。

[引用列表]

[专利文献]

[专利文献1]日本未审查专利申请公开号平成6-178688

[专利文献2]日本未审查专利申请公开号平成6-178689

[专利文献3]日本未审查专利申请公开号平成7-327677

[专利文献4]国际公开号WO2004/101622

[专利文献5]国际公开号WO2006/084758

[非专利文献]

[非专利文献1]The Journal of Infectious Diseases,152,6,1985,1290-1299.

[非专利文献2]Journal of General Microbiology,133,1987,3581-3590.

发明内容

[技术问题]

鉴于上述情况而做出本发明，并且本发明的一个目标是提供一种对铜绿假单胞菌具有优良抗菌活性的新型抗体。本发明的一个主要目标是提供一种特异性地结合铜绿假单胞菌菌株E血清型脂多糖的抗体。

[技术方案]

为实现上述目标，本发明采用了以下方法。首先，自患有慢性铜绿假单胞菌肺部感染的囊性纤维化病患者和健康志愿者中收集血液样本。具有高比例的特异性针对脂多糖（下文有时简称为“LPS”）的成浆细胞的供体样本用以下方式鉴定：(1)FACS分析，其测定循环血液中成浆细胞和浆细胞的量；(2)ELISPOT分析，其测定循环血液中产生特异性针对特定LPS抗原的抗体的细胞的量；(3)ELISA分析，其测定存在或不存在特异性针对特定LPS抗原的免疫球蛋白。之后，从由此鉴定的供体样本制备识别LPS的抗体。

具体而言，存活的成浆细胞是通过使CD19、CD38、λ轻链和死细胞染色而选择。在选出的成浆细胞上，通过包括多重重叠延伸RT-PCR和后续巢式PCR的两步PCR将来源自相同B细胞的编码重链可变区（VH）和轻链可变区（VL）的DNA序列（图1）结合起来。之后，将扩增的DNA插入筛选载体，然后转化到大肠杆菌（Escherichia coli）中。从大肠杆菌中纯化全部扩增载体。所得抗体库在动物培养细胞中表达。编码结合于纯化LPS分子的抗体的克隆是通过ELISA来筛选，并选出LPS-特异性的克隆。然后，测定所选出克隆的碱基序列。之后，检验由此获得的克隆所编码的抗体的各种活性、其血清型特异性和抗原表位。

结果，发现所鉴定的抗体结合铜绿假单胞菌E血清型LPS，并具有优良的体外和体内抗菌活性。

具体而言，本发明涉及结合于铜绿假单胞菌E血清型LPS的抗体，其显示出优良的抗菌活性。本发明还涉及所述抗体的应用。更具体地，本发明提供了：