[发明专利]毛线虫属的抗原性多肽及其用途

说明书

本发明涉及在毛线虫属(Trichinella)寄生虫中鉴定的新型抗原在毛线虫病(Trichinosis)的诊断和预防中的用途。

毛线虫病是与食用感染有毛线虫属寄生虫的肉类相关的人畜共患病(zoonosis)(MURRELL et al.,Vet Parasitol,93,293-307,2000)。

这种线虫属于有腺纲(Adenophorea)，毛线虫科。毛线虫科包括具有亲缘关系的八个种和三个基因型，并在系统发育上被分为不同的两组：一组为感染哺乳动物的有包囊毛线虫(旋毛形线虫(T.spiralis)、北方毛形线虫(T.nativa)、布氏毛形线虫(T.britovi)、米氏毛形线虫(T.murrelli)、南方毛形线虫(T.nelsoni))；另一组为感染哺乳动物、鸟类以及爬行动物的没有包囊的毛线虫(伪毛形线虫(T.pseudospirali)、巴布亚毛形线虫(T.papuae)、津巴布韦毛形线虫(T.zimbabwensis))(GASSER et al.,Electrophoresis,25,3357-64,2004)。这些种类全部可以感染人体。

这种寄生虫的生物周期属于自异宿主型，即整个生物周期都发生于同一宿主体内，此宿主既为中间宿主，又是终宿主(BOIREAU et al.,Revuedeslaboratoires,71-89,2002)。为了开始新一轮的周期，侵染性幼虫需要从一个宿主传递到另外一个宿主。这种传递是通过摄取被寄生虫幼虫污染的生肉或几乎不经烹调的肉而实现的。消化过程中，所述幼虫被释放出来，穿透肠道上皮，并在此转变为有生殖能力的成虫(Ad)。接下来，受精的雌虫排出新生的L1幼虫(NBL)。这些NBL幼虫通过淋巴循环和血流到达横纹肌，并穿透肌肉细胞(感染发展阶段L1M：L1肌肉幼虫)，引起肌肉细胞的去分化，形成被保护性胶原蛋白被膜包围的滋养细胞，其中，在有包囊的毛线虫情况下形成的被膜较厚，而无包囊的毛线虫的被膜很薄。

虽然毛线虫病在动物中是没有临床症状的，但是在人体感染中，肠道寄生阶段的表现为伴有恶心的腹泻、呕吐和剧烈的腹痛，而肌肉侵入阶段相关症状为发热、面部浮肿及肌痛的综合症状(CAPO & DESPOMMIER,Clin Microbiol Rev,9,47-54,1996)。眼、肺、胃肠、心脏以及神经的发病可以产生更多的临床表现，其发展是可以致命的。以病人持久的肌肉疼痛为标志的慢性感染特性与寄生虫在滋养细胞中存活有关。

如果对于感染的诊断及时，从而得以针对所有寄生环节采取措施，特别是在L1M幼虫周围形成胶原蛋白保护被膜之前，这样使用抗蠕虫药专门治疗人毛线虫病会更加有效(FOURESTIE et al.,Parasitol Res,75,36-41,1988)。

流行病学数据表明了该寄生虫在世界各地的地理分布，并与其传播方式相关，所述传播方式涉及到了许多野生动物群物种，所述野生动物群物种还保留了以猪为主要代表的家畜感染周期(DUPOUY-CAMET,Vet Parasitol,93,191-200,2000)。

由于对饮食习惯及卫生控制的不力，人毛线虫病，这种新兴或再度出现的人畜共患病，其流行构成了全世界严峻的公共卫生问题(MURRELL & POZIO,IntJ Parasitol,30,1339-49,2000)。这些流行主要关系到猪肉、野猪肉及马肉(BOIREAU et al.,Vet Parasitol,93,309-20,2000)。

因此，预防人类感染就涉及到把肉完全煮熟和改善动物饲养条件和/或改进用于控制动物(猪、马、野猪和其它对毛线虫属敏感的野生动物)毛线虫病的条件(BOIREAU et al.,Revuedes laboratoires,71-89,2002)。

毛线虫病的筛选技术可分为两大类：1)人工消化肌肉样本后直接检测L1M幼虫，和2)用各种免疫学方法间接检测针对毛线虫属抗原的抗体。

该寄生虫的每个发育阶段，即成虫(Ab)、L1幼虫(NBL)、及L1肌肉幼虫(L1M)，都有与之相对应的特定抗原谱。

现阶段用于免疫诊断的抗原制品源自L1M阶段幼虫。这是由于两个早期阶段Ad和NBL的抗原性级分难于纯化，并且直到近期，才鉴定了和这两个阶段中一者和/或另一者相关联的免疫显性抗原(LIU et al.,1-13,2007)。

不论是通过裂解幼虫、离心裂解物和回收上清得到的总可溶性抗原制品，还是更普遍的排泄/分泌抗原(E/S抗原)，都被广泛使用。