[发明专利]A25噬菌体溶解酶

说明书

相关的申请

本申请主张在美国临时申请，申请号61/298,039,申请日为2010年1月25日，的优先权，该申请的全部被引用作为本申请的一部分

技术领域

本发明涉及从噬菌体A25上分离的一种新的蛋白和核酸，及这些蛋白和核酸的诊断和治疗用途，也涉及它们作为药物组分治疗链球菌感染的用途。这个发明也涉及从噬菌体A25鉴定、分离和克隆特定基因，特别是噬菌体A25细胞裂解酶，称为PlyA，涉及使用这个基因和基因产品帮助诊断A组链球菌感染，及对预防A组链球菌感染的药物和治疗作用。

背景技术

化脓性链球菌为革兰氏阳性A族链球菌属细菌，人类几种疾病的病原菌，包括咽炎和/或扁桃体炎，皮肤感染（脓疱病，丹毒，脓皮病等形式），急性风湿热（ARF），链球菌感染后肾小球肾炎（PSGN），猩红热（SF）和中毒性休克综合征（TSLS）。急性风湿热是全球引起小儿心脏病的最常见的病因。例如，据估计，在印度，超过600万学龄儿童患有风湿性心脏瓣膜病。在美国，“喉咙痛”是第三大常见病，其中大约30%是由儿童化脓性链球菌引起。在美国每年大约有1-2亿美元的医疗费用用于治疗约25-35百万例链球菌咽炎。

发明内容

本发明涉及到噬菌体A25核酸和蛋白序列的分离和说明，以及使用该核酸和蛋白序列的诊断和治疗作用，特别是对A组链球菌。此外，根据已确定一个开放读码框推导出一个多肽。利用现有的序列数据手段，分离的PlyA细胞裂解酶的裂解作为开展诊断和治疗用途。

因此，一方面，本发明提供噬菌体A25全长核酸序列的分离方法和序列说明，如SEQ ID NO：1。发明的第二个部分为噬菌体A25多肽全长序列的分离方法和序列说明，如SEQ ID NO：2。下面对序列诊断和治疗效用做详细的说明和描述。

本发明的另一个方面提供了致病性链球菌感染的诊断方法。在一个具体实施方式中，含有A组链球菌细胞的临床样品与本发明所述的PlyA多肽进行预处理。如果样品中存在的A组链球菌细胞，预处理临床样品可以使抗体检测到裂解酶裂解的组分。

一种诊断致病性链球菌感染的方法，可包括：a）提供可能含有链球菌的患者样品;b）让样品与PlyA多肽接触;和c）检测样品中的A组链球菌分析物；其中，如果在待测样品中存在A组链球菌分析物，表明主体受链球菌感染。一个实施方式中，PlyA多肽的氨基酸序列与SEQ ID NO：2的序列相似性大于80％。在另一个实施方式中，PlyA多肽包括SEQ ID NO：2。

本发明可能用到的诊断测试方式，包括酶联免疫吸附检测，横向流动检测，或放射免疫法。在这些方式中，可以直接利用PlyA蛋白和/或针对链球菌抗原制备抗体，并按照试剂盒说明来测试病人样品中是否存在致病性链球菌。酶联免疫吸附试验或放射免疫法的方法对本领域的一般技术人员是熟知的。

PlyA可直接用于检测临床样品中的A组链球菌细胞。例如，一个PlyA的结合域被标记，用本领域的一般技术人员熟知的如化学荧光或蛋白质标记，然后被标记的PlyA直接与从主体分离的可能含有致病链球菌的样品共培养。观察到样品中的结合标记物，如荧光，表明主体受到致病性链球菌的感染。

在一个进一步的实施方式中，提供了PlyA在活性测定中的作用如荧光素-荧光素酶检测，以帮助诊断致病性链球菌感染。在这样一个测定方式中，可能含有致病性链球菌的样品直接与PlyA一起培养。如果样品中含有的致病性链球菌，PlyA将与细菌结合，导致细菌的裂解，随后释放通常存在与细菌细胞质的ATP或其他组件，如酶。然后裂解液用荧光素-荧光素酶检测。在另一个实施方式中，可能含有致病性链球菌的样品可直接添加到具有荧光素-荧光素酶的PlyA中，加荧光素-荧光素酶前无需收集细胞裂解液。如果是样品中存在致病性链球菌，裂解的细菌细胞释放的ATP会引发荧光素-荧光素酶系统的阳性反应，从而在反应混合物中产生可检测的光。