[发明专利]生猪肉检测法及其检测试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及一种检测非加热食品中的（生）猪肉的方法及其检测试剂盒。本发明更具体地涉及使用通过用猪血清中的免疫球蛋白G对动物免疫获得的可特异性地识别该免疫球蛋白G的抗体来检测非加热食品中的（生）猪肉的免疫层析测定试剂。

背景技术

EU科学运营委员会在其意见中报告了牛脑海绵状病(BSE)等牛传染病对人传染的危险性，自此，BSE感染牛的肉骨粉在家畜饲料中使用的问题受到重视。另外，对假冒食品的检查，如被视为地方品牌的假冒品牌牛肉等的假冒食品的检查，也受到了很大的关注。

另一方面，食物变态反应患者会因食品中所含的食物变态反应原而引发哮喘、皮炎、胃肠功能障碍、过敏性休克等各种变态反应症状，有时还有造成了非常严重的后果的病例。食物变态反应患者还有增加的倾向，消费者对于食品的安全性的关心也非常高。

通常已知的含有食物变态反应原的代表性食品有：谷类（荞麦、小麦等）、蛋类、肉类（牛、猪、鸡等）、鱼类（鲭鱼、沙丁鱼等）、牛乳类、甲壳类（蟹等）、软体动物类、豆类（花生、大豆等）、果实类（芒果等）、蔬菜类（蒜等）等，这些食物变态反应诱发食品中含有谷蛋白、明胶、酪蛋白、卵清蛋白、卵类粘蛋白、溶菌酶、α-乳清蛋白、β-乳球蛋白等食物变态反应诱发成分。加工食品中也含有很多食品或食物变态反应原，目前的现状是无法简便地检测出它们。

另外，对于进行了加工处理（加热、加压、酶解处理、冷冻、干燥、盐藏等）的食品，由于处理而使食品中的蛋白质成分发生分子结构性的改性或分子修饰。因此，为了简便地检测出加工食品中的这些成分，针对加工处理过的成分和未经加工处理的生鲜成分分别使用与其对应的适当的抗原或表位是非常重要的，这方面的探索和研究也得到了进展。

例如，人们发现：作为用于检测在高温、例如超过100℃的温度条件下加热处理存在于罐装食品或家畜用饲料等试样中的来自以牛、猪、鸡为代表的动物性组织的原料的检测试剂，用加热改性的血清白蛋白作为免疫原对动物进行免疫所生产的抗体可特异性地识别该加热改性的血清白蛋白，而对非加热的血清白蛋白不显示交叉反应性，从而提供了一种用于检测试样中加热处理过的来自动物性组织的原料的存在的方法（包含免疫层析法）。（参照专利文献1、专利文献2）

将含有未改性和/或改性物质的食物变态反应原的混合物（蛋白质）对动物免疫所得到的IgE（免疫球蛋白E）抗体，以及使用该抗体检测食物变态反应原和食物变态反应诱发性食品的方法（包含免疫层析法）是公知的。（参照专利文献3）

不仅如此，将已经保藏的特定细胞（加热的猪肉中的特定蛋白质对动物免疫所得的细胞）生产的单克隆抗体用于ELISA（免疫学测定的1种）方法中以检测加热处理的食品中的猪肉也是公知的。（参照专利文献4）

由于该检测方法使用了由特定细胞（加热的猪肉中特定蛋白质对动物免疫所得的细胞）生产的单克隆抗体，因此可以准确地进行检测。然而，单克隆抗体的制备需要高额费用，因此该方法不适合针对医疗领域中的多数患者或具有不同饮食文化的一般消费者的普及。

本发明人使用多克隆抗体代替使用上述单克隆抗体，对检测非加热食品中的生猪肉的免疫层析法进行了深入的研究。结果，在使用对兔进行免疫得到的来自兔的多克隆抗体时，发现即使仅有标准缓冲液也会发生反应，并且观察到很强的非特异性反应，因此从精度方面考虑无法使用。如上所述，在使用多克隆抗体、通过免疫层析法检测试样中的检测对象物—非加热食品中的生猪肉时，可观察到依然发生非特异性反应。因此，无法充分抑制非特异性反应的问题依然存在。

目前，作为检查是否有向绞肉类中混入其它肉类（牛、猪、鸡等）的方法，公知的是一种免疫学方法CEIA法(cloth-based enzyme immunoassay)。已经知道，该方法是使用标记抗体检查有否猪肉混入，该检查中使用的标记抗体（偶联物）是兔抗猪IgG-辣根过氧化物酶(HRP)标记抗体。（参照非专利文献1）。

但是，该CEIA法的检查时间约需30分钟左右，并且在检查牛肉中有否混入其它肉类时必须有5%以上的混入浓度。因此，该方法的检出灵敏度差，无法满足实际应用。

为了将该CEIA法应用于更实用的、简便的、检测时间迅速的免疫层析法，本发明人进行了进一步的研究。结果发现，在尝试使用兔抗猪IgG作为检测抗体时，引发了非特异性的识别，这使得其无法使用。因此，需要进行进一步的研究。