[实用新型]心血管疾病相关高密度脂蛋白（HDL）含量检测试剂盒

说明书

技术领域

本实用新型涉及分子生物学和医学领域，具体涉及检测心血管疾病相关高密度脂蛋白（HDL）含量的试剂盒，通过同时检测与心血管疾病密切相关的血浆胆固醇酯转移蛋白（CETP）和LIPC蛋白（LIPC）的单核苷酸多态性位点基因型来评估个体患心血管疾病的风险。

背景技术

目前，心血管疾病仍然是西方发达国家各种死亡原因之首。在我国，心血管疾病死亡率已位居人口总死亡率的第一位。冠状动脉硬化粥样硬化是冠心病的主要病理改变。多至脂蛋白和载脂蛋白都与动脉硬化有密切联系。

血浆胆固醇酯转移蛋白（CETP）又称脂质转移蛋白Ⅰ（LTP-1），主要功能是将高密度脂蛋白（HDL）中的胆固醇酯（CE）向富含载脂蛋白B（apoB）的低密度脂蛋白（LDL）和极低密度脂蛋白（VLDL）转运，同时以等摩尔的比例将后者中的甘油三酯（TG）反向转移，完成胆固醇逆向转运（RCT）中的重要步骤。除此而外它还可以影响HDL颗粒的大小和构型，在调节各种脂质成分的比例和脂蛋白的平衡中起重要作用。

CETP基因位于16号染色体（16q21），由25kb基因编码，与LACT基因和结合珠蛋白基因毗邻，由16个外显子和15个内含子组成。

CETP介导CE和TG在HDL与VLDL及LDL之间转移，参与胆固醇的逆向转运过程，调节血浆脂蛋白中的脂质成分，同时在此过程中改变DHL颗粒的大小和亚型，因此CETP与动脉粥样硬化之间存在必然联系。

CETP在调节循环中的胆固醇水平，维持其代谢稳态上起重要作用，CETP本身的改变可以引起冠心病发病机制某一环节中重要因素（如LDL-C，TG，HDL-C）的变化。但在脂质代谢已发生紊乱的情况下机体也可以代偿性地调节CETP的浓度和活性以适应异常的血脂水平。虽然这种代偿性可能是不完全的，但其结果却可以使得最终不到CETP与冠心病总的相关关系。近来发现CETP可以介导动脉壁泡沫细胞和粥样斑块中的胆固醇外流，提示CETP可以作为机体的一种调节方式独立与HDL而直接与动脉粥样硬化发生联系。在不同人种，不同环境和代谢状态下观察到CETP基因缺陷引起了HDL-C水平改变。

肝脂肪酶基因（Hepatic lipase gene，LIPC）位于染色体15q21，包括9个外显子，全长35kb，编码449个氨基酸。因其存在各种多态性而致其编码的肝脂肪酶（Hepatic lipase，HL）活性有不同程度改变，可能与冠心病相关。目前，对LIPC多态性与冠心病之间相关性研究的方法和结论如下。

方法：对91例冠心病入院后12小时内，72例对照组空腹晨起静脉采血，从全血中抽提基因组DNA，多聚酶链反应一限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)技术分析LIPC两个多态性在中国汉族冠心病人群中的发生频率和基因型分布。结果：1．LIPC转录起始部位—480NlalII酶切位点C—T多态性在以冠脉造影结果分组的冠心病与正常对照组比较TT纯合子基因型频率为17.9% VS 7.7%，但无显著性差异(P=0.099)。亚组分析中，三支病变与健康对照组25% VS 7.7%，有显著性差异(P=0.03)。按照WHO关于缺血性心脏病的命名和诊断标准分型的冠心病与正常对照组比较TT纯合子基因型频率为15.4% VS 8.3%，无显著性差异(P=0.373)。亚组分析中，心臃梗塞与健康对照组28.1% VS 8.3%，有显著性差异(P=0.023)。2．LIPC7号外显子Mse I酶切位点A—c多态性病例组中发现1例cc纯合子，4例Ac杂合子，健康对照组未发现CC纯合子，7例Ac杂合子。两种分类法中，此多态性与冠心病及各亚组均无显著性差异。(P>0.05)结论：1．LIPC转录起始部位—480 C—T NlalII酶切位点TT纯合子可能是心肌梗塞，冠脉三支病变等较为严重冠心病发生的一个危险因素。2．LIPC 7号外显子Mse I酶切位点多态性可能与中国汉族人群冠心病发生无关。

发明内容

本实用新型针对目的是提供一种采用荧光定量PCR技术同时检测两个影响高密度脂蛋白（HDL）含量的基因SNP位点的试剂盒。该试剂盒由包装盒体、衬垫、装有检测两个SNP位点的荧光定量PCR反应液的两个试管、装有阳性对照品的一个试管、装有阴性对照品的一个试管组成，衬垫上设有容器孔，分别放置两管荧光定量PCR反应液、阳性对照品和阴性对照品。