[实用新型]痛风相关尿酸浓度检测试剂盒

说明书

技术领域

本实用新型涉及分子生物学和医学领域，具体涉及检测痛风相关尿酸浓度的试剂盒，通过同时检测与痛风密切相关的葡萄糖易化转运蛋白-9（SLC2A9）和三磷酸腺苷结合盒转运蛋白G2（ABCG2）的单核苷酸多态性位点基因型来评估个体患痛风的风险。

背景技术

血尿酸增高（高尿酸血症）导致痛风，当尿酸达超饱和状态时，可在关节内形成单钠尿酸盐结晶。对某些人来说，这些晶体可诱发疼痛性自限性炎性反应，即急性痛风性关节炎。高尿酸血症最重要的原因是尿酸从尿中排泄减少，而尿酸的排泄是由表达在肾集合管上的尿酸转运分子来调节的，这是痛风发生的关键病理生理。发生痛风其他的关键点是肝脏尿酸盐生成、单钠尿酸结晶形成和急性炎症反应触发。调节尿酸浓度的全基因组相关扫描证实有2种主要的高尿酸调节分子——肾脏尿酸转运子SLC2A9和ABCG2。

葡萄糖易化转运蛋白-9（Facilitated Glucose Transporter 9，SLC2A9, GLUT-9）是溶质运载蛋白家族成员（Solute Carrier Family）之一，在维持体内葡萄糖代谢的相对稳定和平衡中具有重要作用，还可能参与软骨基质中成骨细胞的生长发育的调控，其表达异常或变异还可能与尿酸转运异常有关。SLC2A9基因定位于5号染色体（5B3），有2个变体，分别由540aa和511aa组成，在小鼠阴道，结缔组织，肺和脾脏等组织表达丰富，而人类只在正常肾脏有效高的表达，在卵巢肿瘤，子宫和软骨肉瘤时呈现高表达。

之前对于尿酸转运蛋白的研究，主要集中于尿酸如何由肾小管转运至上皮细胞内部，而对其如何从细胞内进入血液的过程，研究甚少。最近Promsuk等发现GLUT9是一种果糖转运蛋白，属于SLC2A9家族，在肾脏中固定在肾小管上皮细胞基地外侧膜上，主要负责将尿酸分泌到细胞外。该蛋白的转运功能并不依赖于Na⁺，而当细胞外K⁺浓度升高时，其转运功能增强。Promsuk等将其命名为电势驱动尿酸转运蛋白1（voltagedriven urate transporter 1，URATv1）。肾脏低尿酸血症患者证实了该蛋白在人体内对尿酸的转运作用，该患者编码URAT1的SL22A12的基因序列正常，而编码GLUT9的SLC2A9上P412R基因序列发生了缺失型突变。同事，Veronique等通过对克罗地亚人基因组研究发现，尿酸浓度变化的1.7%~5.3%与SLC2A9基因序列有关，同时该基因序列的多样性与英国人群，克罗埃西亚人群，德国人群样本的尿酸分级排泄减少有关，该蛋白尿酸转运功能通过爪蟾卵模型（Xenopus laevis oocytes）得到验证。Dinour等研究了两个患者有严重遗传性低尿酸血症的家庭，其中一个家庭6个成员SLC2A9上的L75R发生错义突变，另一个发生36kb的缺失突变，蛋白合成不完整。结果说明，L75R基因突变严重影响尿酸的正常重吸收。目前通过基因组多样性研究，已经发现有6个SLC2A9单核苷酸多态性（rs6855911，rs7442295，rs6449213，rs12510549，rs737267，rs1014290）与血清尿酸浓度有关。

1998年Doyle等首先在乳腺癌细胞株MCF-7/AdrVp中检测到一种跨膜转运蛋白，成为乳腺癌耐药蛋白（breast cancer resistance protein，BCRP），系统发育分析该基因为ABC转运蛋白超家族（ATP-binding cassette transporter superfamily，ABC transporter superfamily）G亚家族第2成员，命名为ABCG2。ABCG2定位于细胞膜，在正常组织中分布广泛，主要分布于具有分泌和排泄功能的组织如胎盘合体滋养层、小肠和结肠上皮、肝脏小管膜、胆小管膜、乳腺小叶及血管内皮细胞中。人类ABCG2基因位于4q22~23，编码655个氨基酸残基。ABCG2全长66kb，由16个外显子和15个内含子组成，外显子为60~332bp不等。ABCG2在人体内承担着一定的生理功能，如维持细胞稳态、血脑屏障、胎血屏障等，同时与疾病的易感性及药动学等相关。