[实用新型]分离疟原虫子孢子专用纤维素柱无效
申请号: | 201120048837.5 | 申请日: | 2011-02-28 |
公开(公告)号: | CN202022916U | 公开(公告)日: | 2011-11-02 |
发明(设计)人: | 张锡林;王利芳 | 申请(专利权)人: | 中国人民解放军第三军医大学 |
主分类号: | C12M1/00 | 分类号: | C12M1/00 |
代理公司: | 北京同恒源知识产权代理有限公司 11275 | 代理人: | 赵荣之 |
地址: | 400038 重*** | 国省代码: | 重庆;85 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 分离 疟原虫 孢子 专用 纤维素 | ||
技术领域
本实用新型涉及疟原虫子孢子的分离技术,具体涉及一种分离疟原虫子孢子的专用实验装置。
背景技术
疟原虫(plasmodium)寄生于人及多种哺乳动物,目前已知有130余种。人体疟原虫的生活史,需要人和雌性按蚊做宿主,疟原虫在人体内先后经肝细胞和红细胞内发育。在肝细胞内为裂体增殖,称红细胞外期(红外期);在红细胞内发育包括红细胞内裂体增殖期(红内期)和配子体形成的有性期开始。
蚊唾液腺内含有疟原虫子孢子的雌性按蚊刺吸人血时,感染性子孢子随蚊的唾液进入人体,经血液循环约30分钟子孢子侵入肝细胞导致疟疾感染。虫体经红外期、红内期发育致疟疾发病。子孢子入侵肝细胞是由于子孢子表面有一种蛋白(环子孢子蛋白,CSP)能与肝细胞表面的疟原虫受体相结合,使两者接触。然后,子孢子释放由棒状体内贮存的分泌物,作用于接触的肝细胞膜,而主动侵入肝细胞。雌性按蚊的一对唾液腺内可含有1000~10000个子孢子,疟原虫子孢子呈梭形,长约10~15μm,宽约1μm。在疟疾实验研究中,有时需大量有感染力的子孢子,但感染按蚊分离和纯化子孢子较困难,尤其是没有一种分离疟原虫子孢子的专用实验装置,使分离更加困难。
发明内容
有鉴于此,本实用新型的目的在于提供一种分离疟原虫子孢子专用纤维素柱,该纤维素柱作为分离疟原虫子孢子的专用实验装置,其分离效果好,适用于大规模分离。
本实用新型的分离疟原虫子孢子专用纤维素柱,包括底部开孔的中空柱体,柱体内从下至上依次填充有玻璃纤维层和DE 52纤维素层。
进一步,所述柱体为圆柱形柱体,所述孔设置于柱体底部中心;
进一步,所述DE 52纤维素层包括缓冲液和经过缓冲液充分浸泡的DE 52纤维素。
本实用新型的有益效果在于:本实用新型是一种纯化分离雌性按蚊体内疟原虫子孢子的专用纤维素柱,使用该纤维素柱的子孢子分离率达70~80%,并保持疟原虫子孢子感染活力和抗原性,可用于实验性研究。
附图说明
为了使本实用新型的目的、技术方案和优点更加清楚,下面将结合附图对本实用新型作进一步的详细描述,其中:
图1为本实用新型的结构示意图;
图2纯化的约氏疟原虫的唾液腺子孢子染色图,吉氏染色 100×;
图3相差显微镜观察纯化的约氏疟原虫的唾液腺子孢子,60×。
具体实施方式
图1为本实用的结构示意图;如图所示,本实用新型的分离疟原虫子孢子专用纤维素柱,包括底部开孔4的中空柱体1,柱体1内从下至上依次填充有玻璃纤维层2和DE 52纤维素层3。
本实施例中,所述柱体1为圆柱形柱体,所述孔4设置于柱体1底部中心。
本实施例中,所述DE 52纤维素层3包括缓冲液和经过缓冲液充分浸泡的DE 52纤维素。
本实用新型的分离疟原虫子孢子专用纤维素柱的制备方法:
1、配制缓冲液,每升缓冲液含有8.8g羟甲基氨基甲烷、5g NaH2PO4.H2O、5gNaCl和18g葡萄糖,用HCl调节pH至8.2,离子强度0.121;
2、将预先溶胀好的DE 52纤维素在缓冲液中充分浸泡,使DE 52纤维素的pH和离子强度与缓冲液平衡;
3、选用玻璃或塑料制造的底部开有中心孔的中空圆柱形柱体,在柱体底部铺上一层片状的玻璃纤维;
4、将平衡好的DE 52纤维素和缓冲液一起灌装入柱体内,使DE 52纤维素自然沉降,柱床中不得留有气泡;
5、装好平衡后的纤维素柱贮存在-30℃中,使用前再使用缓冲液淋洗,直至达到充分平衡方可使用。
使用本实用新型的纤维素柱分离疟原虫子孢子的方法:
A、预处理
将含有疟原虫子孢子的按蚊匀浆,对匀浆液离心,收集上清液,去除大块蚊组织碎片,获得含疟原虫子孢子匀浆液,并用细胞计数器进行疟原虫子孢子计数;
B、分离疟原虫子孢子
将步骤A所得子孢子匀浆液与缓冲液以体积比1:1-3的比例混合,获得子孢子匀浆稀释液,将所述子孢子匀浆稀释液在重力作用下过本实用新型的纤维素柱,流速为5-7 mL/min,收集洗脱液5,所述洗脱液5中含有疟原虫子孢子,如图2和图3所示。
最后说明的是,以上实施例仅用以说明本实用新型的技术方案而非限制,尽管通过参照本实用新型的优选实施例已经对本实用新型进行了描述,但本领域的普通技术人员应当理解,可以在形式上和细节上对其作出各种各样的改变,而不偏离所附权利要求书所限定的本实用新型的精神和范围。
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