[发明专利]人成纤维细胞生长因子21融合蛋白及其突变体的制备与应用

权利要求书

1.一种融合蛋白，由人成纤维细胞生长因子21(FGF21)及突变体通过连接肽(Linker)与IgG-Fc或IgG-Fc突变体形成，其通式为FGF21-Linker-IgG-Fc或者IgG-Fc-Linker-FGF21。

2.权利要求1所述FGF21为人成纤维细胞生长因子21(SEQ ID NO：1)或其突变体，根据本发明的一方面，所述FGF21突变体选自如下任意一个突变或者多突变的任意组合，其中突变位点选自：

(a)45位丙氨酸突变为精氨酸，谷氨酸，谷氨酰胺，赖氨酸或苏氨酸；

(b)98位亮氨酸突变为精氨酸，谷氨酸，谷氨酰胺，赖氨酸或苏氨酸；

(c)111位丙氨酸突变为苏氨酸或赖氨酸；

(d)129位丙氨酸突变为精氨酸，天冬酰胺，天冬氨酸，谷氨酸；

(e)170位甘氨酸突变为丙氨酸，天冬酰胺，半胱氨酸或脯氨酸；或

(f)171位脯氨酸突变为谷氨酸，组氨酸，谷氨酰胺，苏氨酸或酪氨酸。

3.权利要求1所述Linker选自序列SEQ ID NO：2，SEQ ID NO：3，SEQ ID NO：4，SEQ ID NO：5，SEQ ID NO：6或SEQ ID NO：7，也可以选自(GGGGS)n，其中n可以是1，2，3，4，5或6。

4.权利要求1所述Linker可以选自SEQ ID NO：8，其中n可以是1，2，3，4，5或6，另外，也可以直接连接，或者为其它甘氨酸富集的连接肽。

5.权利要求1所述IgG-Fc(铰链区-CH2-CH3)序列为人IgG1、IgG2、IgG3或IgG4的Fc及其突变或缺失体，上述序列选自SEQ ID NO：9，SEQ ID NO：10，SEQ ID NO：11或SEQ ID NO：12，或者选自上述IgG-Fc序列的杂合体，其中IgG-Fc序列参照EU(Kabat)指数进行编号，重要的是上述IgG-Fc突变体选自序列SEQ ID NO：13，SEQ ID NO：14，SEQ ID NO：15，SEQ ID NO：16，上述突变位点可以是单个位点突变或是选自如下多位点突变组合，其中：

Xaa₁＝Gln或Thr

Xaa₂＝Gln或Thr

Xaa₃＝Leu，Met或His

Xaa₄＝Ala或Asn。

6.根据权利要求1所述，更进一步，与FGF21相连的融合蛋白可以选自人血白蛋白或转铁蛋白，也可以选自人血白蛋白或转铁蛋白部分片段、突变体和缺失体。

7.权利要求1～5所述融合蛋白应用于人I型和II型糖尿病及肥胖症的预防与治疗，或者其DNA序列应用于基因治疗。

8.权利要求5所述融合蛋白突变体，是基于增加与FcRn的亲和力来进一步增加FGF21在体内的半衰期。

9.权利要求1～5所述融合蛋白使用酵母，CHO，SP2/0，BHK和/或HEK293细胞进行表达， 蛋白纯化过程中使用A或G蛋白葡聚糖凝胶层析柱。

10.权利要求1～5所述融合蛋白使用大肠杆菌进行表达。