[发明专利]微量尿白蛋白胶体金检测试剂盒及其制备工艺

说明书

技术领域

本发明涉及胶体金免疫层析领域，具体涉及一种微量尿白蛋白胶体金检测试剂盒及其制备工艺。

背景技术

微量白蛋白尿(又名微量尿白蛋白，Microalbuminuria，MAU)是指在尿中出现的微量白蛋白。白蛋白是一种血液中的正常蛋白质，在正常生理条件下尿液中也会出现极少量白蛋白，排泄量一般在30mg/天(或20mg/L)之内。人尿液中的白蛋白达到在30～300mg/天或20～200mg/L浓度间称为微量白蛋白尿，白蛋白浓度大于300mg/天或200mg/L时称为大量白蛋白尿。

微量尿白蛋白(MAU)的非正常出现，通常被认为是肾功能衰竭、糖尿病和心血管疾病并发症等的重要临床标志之一。因此，尿液中白蛋白存在水平的检测对肾病、糖尿病和心血管疾病的早期诊断、早期治疗和减小风险有重要的参考价值和临床意义。

目前，临床检测微量蛋白质诊断早期肾损害的方法有放射免疫分析法(RIA)、酶联免疫吸附实验法(ELISA)等，这些检查较为繁琐、历时较长、费用较高，不利于临床医生的及时诊断和疗效观察。

国内现有的微量尿白蛋白检测方法的相关专利有：申请号01126895.6，提供了一种快速检测肾脏损害的尿蛋白芯片，但其未对芯片的制备工艺、检测灵敏度、最低检出量等重要特性给予阐述，限制了其应用的可靠性。本发明的目的在于提供一种检测试剂盒是利用胶体金层析技术，以抗原抗体免疫反应法，来检测人尿液中出现的微量白蛋白，该试剂盒具有等优点。

发明内容

本发明的目的是克服现有技术缺陷，从提高检测灵敏度出发，提供一种检测灵敏度高、特异性强、检测快速的微量尿白蛋白胶体金检测试剂盒。

本发明一方面公开了一种微量尿白蛋白胶体金检测试剂盒，包括试剂条，所述试剂条包括衬底、滤样纸、免疫胶体金纸片、免疫硝酸纤维素膜和吸水纸，滤样纸、免疫胶体金纸片、免疫硝酸纤维素膜和吸水纸依次首尾衔接并固定于衬底上；所述免疫胶体金纸片上包被有胶体金标记的抗人白蛋白单克隆抗体I，所述免疫硝酸纤维素膜上设有包被有抗人白蛋白单克隆抗体II的检测线和包被有羊抗鼠IgG的质控线。

较优的，所述胶体金的颗粒大小为39～42nm，所述胶体金是由两步还原法制备获得。

更优的，所述两步还原法的步骤为：

a)第一次还原氯金酸溶液：制备浓度为0.0004-0.0005mol/L的HAuCl₄水溶液，加热煮沸20-30分钟，之后边搅拌边加入柠檬酸三钠水溶液，HAuCl₄与柠檬酸三钠的摩尔比为1∶8～9，超声振荡2-3分钟后冷却至室温，即制得14～16nm粒径的胶体金原溶液；

b)第二次还原氯金酸溶液：将第一步制得的胶体金原溶液放置4.0℃水浴中保持温度恒定，随后按胶体金原溶液与HAuCl₄水溶液体积比1∶1.9～2.0加入4.0℃的0.003-0.004mol/LHAuCl₄水溶液，随后立即边搅拌边滴加4.0℃的抗坏血酸与PVP的混合水溶液，加入的抗坏血酸与本步骤加入的HAuCl₄的摩尔比为25～26∶1，加入的PVP与本步骤加入的HAuCl₄的重量比为1∶2.0～2.1，反应中保持温度恒定，搅拌至反应完全，溶液呈透明的酒红色，制得39-42nm粒径的胶体金溶液；

两步还原法中，配置各种水溶液均采用双蒸水。

最优的，步骤a)中，加入柠檬酸三钠水溶液的浓度为0.01-0.02mol/L。

最优的，步骤a)中，超声震荡的频率为20-30KHZ。

最优的，步骤b)中，抗坏血酸与PVP的混合水溶液的滴加速度为1-2滴/s。

最优的，步骤b)中，所述抗坏血酸与PVP的混合水溶液中，抗坏血酸的浓度为0.017-0.019mol/L，PVP的浓度为0.137-0.139g/L。

步骤b)中，搅拌反应约为50-70分钟。

采用上述方法制得的胶体金清亮透明，粒径尺寸均一，无凝集颗粒，基本未发现非球形粒子。

较优的，所述免疫胶体金纸片是经过预处理的玻璃纤维纸，所述预处理的预处理液包括0.5～0.8v％Tween-20，12～18w/v％蔗糖，溶剂为水。

更优的，所述预处理的预处理液包括0.7％Tween-20，16w/v％蔗糖，溶剂为水。

本发明的另一方面，提供了一种微量尿白蛋白胶体金检测试剂盒的制备方法，包括以下步骤：

1)两步还原法制备胶体金溶液；